半乳糖缺乏IgA1试剂盒，Gd-IgA1 ELISA检测方法

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgA1）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgA1）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

操作步骤

1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.   样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.   除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.   弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.   每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

试剂盒性能

•  检测范围：62.5 U/mL – 2000 U/mL。

•  灵敏度：最低检测浓度小于10 U/mL。

•  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

•  重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。