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扩增效率低:反应条件不够优化。设计更好的引物或探针;改用三步法进行反应;适当降低退火温度;增加镁离子浓度等。
PCR 各种反应成分的降解或加样量的不足。
PCR 产物太长: 一般采用 80~150 bp 的产物长度。