解脲脲原体是最小、最简单的原核生物,球杆状,直径<150gm,细胞内有1环状DNA分子、游离的RNA及核糖体,缺少线粒体、溶酶体和内质网等各种细胞器。近年来发现解脲脲原体引起的泌尿生殖系感染并不少见。解脲支原体寄生于患者或带菌者的尿道和阴道黏膜,一般通过性接触而被感染;婴儿出生时可由产道获得,甚少宫内感染。临床上常采用生物芯片技术对解脲脲原体抗体进行检测。
[检测方法] 生物芯片法
[方法学原理] 以微孔滤膜为载体,利用微阵列技术将纯化的解脲脲原体(Uu)I群、Ⅱ群特异性蛋白固定于同一膜片上,并利用微孑L滤膜的渗滤、浓缩、凝集作用,使抗原抗体反应在固相膜上快速进行,再以免疫胶体金作为标记物直接在膜上显色。显色后的芯片放人芯片识别仪,在专用软件的支持下对不同点阵的灰度值进行分析。
[标本准备] 取新鲜末梢血或静脉血。如采血后24h内不能进行试验,分离血清后将其保存于一20℃环境中。检测时,使样本恢复至室温。
[试剂]
1.蛋白芯片
2.试剂A(洗涤液)
3.试剂B(金溶胶试剂)
[仪器] 蛋白芯片检测系统
[检测步骤]
1.在芯片上标记样品编号。
2.在芯片盒窗口内滴加4滴试剂A,使膜表面完全浸湿。
3.待完全渗入后,室温环境下放置lmin,加待检血清100~1。
4.待血清完全渗入后,滴加6滴试剂5.待试剂B完全渗入后,滴加6滴试剂
6.反应完毕后30min内,将芯片放人饼片阅读系统进行分析。
[结果判断]
检测结果1:Uul群、Uu 2群均为阴性,提示没有被感染。
检测结果2:Uul群阳性、Uu 2群阴性,提示被Uul群感染。
检测结果3:Uu 2群阳性、Uul群阴性,提示被Uu 2群感染。
检测结果4:Uu 1群和Uu 2群均为阳性,提示被Uu感染,并且是复合感染。
[正常参考值] 解脲脲原体阴性
[注意事项]
1.从2~8℃环境取出的芯片须在室温环境下平衡至少lOmin后方可使用。
2.采取血样时患者无须禁食。
3.新鲜血样在2—8℃环境下存放不要超过48h;长期保存的样本应在一20℃以下环境中冻存,避免反复冻融。
4.芯片反应窗口中的膜不能损伤或受潮。
5.芯片应在有效期内使用。若阳性控制点不显色说明芯片已失效,换新的芯片重做。
6.残余的标本与使用过的芯片盒按生物危险晶进行消毒处理。
7.操作时要戴手套,检测完毕彻底洗手。
8.如不慎让任何试剂接触眼部,立即用大量清水冲洗。
[临床意义] 解脲脲原体(Uu)分为两大群14型,第l群为1、3、6、14型,占UU感染的90%-92%;第2群为2、4、5、7、8、9、10、13型,占UU感染的8%~10%。UU不侵入组织和血液,只能黏附于泌尿生殖道的上皮细胞表面,从细胞膜获得脂质和胆固醇,引起细胞损伤,并且解脲脲原体中的脲酶可以水解尿素产生大量的氨,对细胞有毒害作用。同时可吸附于精子表面,阻碍精子的运动。其产生的神经氨酸酶样物质可干扰精子与卵子的结合,引起不育不孕;还可引起尿道结石;也可通过胎盘感染胎儿,引起流产、早产、死胎。