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新一代SPR 技术在钙调蛋白与NOS研究中的应用(二)

2020.5.11
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

蛋白结合分析:将NOS固定OpenSPR的纳米金芯片表面,并对CaM做浓度梯度检测,结果导入TraceDrawer分析。

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(图4 )OpenSPR实时检测,梯度稀释后不同浓度检测出野生型CaM对nNOS(红线)和eNOS 肽(紫红线)的结合情况,观察结合、解离及再生的整个过程,结果显示实验曲线稳定及信号显著。

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(图5) 不同突变的CaM 与cNOS结合数据导入TRACE  DRAWER 软件分析,获取Koff、 Kon及 KD值,结果如下:

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结果显示:CaMcc与cNOS 的亲和力高于wt CaM,相对wt CaM,所有突变型的CaM除了nCaM及CaMcc,与NOS解离速率都加快,并且结果与之前传统方法得出只有CaMc能激活NOS,其他激活效果差或不激活的结果一致,也有效的证明了OpenSPR 在CaM 与cNOS结合研究中的准确性,并且检测方法简单,数据结果丰富,首次阐述了CaM激活cNOS激活机制是因CaM发生了EF手性对突变,利用这个方法下一步继续验证CaM激活eNOS及iNOS 的机制。

(1)Alderton etal.Biochem.J. (2001)357:593

(2) Babu YS,Bugg CE ,Cook  WJ:J.Mol.Bio.(1988)204:191-204

(3) Spratt.D.E.et FEBS(2006)273,1759-1771

 

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Nicoya OpenSPR个人型分子互作仪优势:

·实时无标记

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