前言
杂质分析对于药物的研发至关重要 1。在研究过程中，杂质谱信息能帮助药物化学家优化合成路线和避免潜在的有毒杂质。在开发过程中，当大量母体化合物存在时，鉴定和表征痕量杂质至关重要，从而促进了高分辨率、高灵敏度和高扫描速度的 HR-MS 仪器和智能化结构鉴定软件的发展。
为了展示 HR-MS 在杂质分析和结构鉴定方面的能力，本文选用了市售药物奥美拉唑。本研究采用了赛默飞世尔科技的 Q Exactive Focus 台式 Orbitrap 质谱仪和数据处理软件 Mass Frontier 来快速分析和鉴定奥美拉唑中杂质的结构。
方法
材料与试剂
奥美拉唑（CAS# 73590-58-6）购自 Sigma-Aldrich，
产品号 O104-100MG。
乙腈和水来自 Fisher Scientific
乙酸铵购自 Sigma-Aldrich，产品号 73594-25G-F。
甲酸购自 Sigma-Aldrich，产品号 33015-500ml。
样品前处理
奥美拉唑溶液（0.5 mg/mL）配制在 1:1 乙腈 / 水混合溶剂中。
HPLC 方法
色谱分离采用Thermo Scientific Ultimate3000 UHPLC系统。
色谱柱： Thermo Scientific Hypersil GOLD 柱，2.1mm×150mm，粒径 3 μm.
柱温： 35 ℃，流速： 0.5 mL/min，进样体积： 8 μL
流动相： A - 水； B - 乙腈； C -100 mM 乙酸铵，用乙酸调节 pH 值到 5
梯度洗脱：
质谱方法
质谱分析采用 Thermo Scientific Q Exactive Focus 质谱仪的电喷雾正离子模式。在 70,000 和 35,000 分辨率 FWHM@m/z 200 下分别采集高分辨全扫描一级质谱数据和数据依赖二级质谱数据。
离子源条件：
离子化模式：正离子 ESI
离子源： HESI-II
鞘气流速： 45 单位 N2
辅助气流速： 10 单位 N2
喷雾电压（KV）： +3.5
毛细管柱温度（℃）： 320
S-lens RF 水平： 50.0
加热器温度（℃）： 400
Q Exactive Focus 方法参数：
AGC 目标（全扫描）： 3e6
AGC 目标（MS/MS）： 1e5
碰撞能量： 30， 35% 阶梯变化
扫描范围（全扫描 MS）： 180 到 1200 amu
结果与讨论
I. 高分辨率全扫描 -HCD MS/MS 鉴定杂质
采集得到奥美拉唑的高分辨率全扫描和三个最高强度的数据依赖 HCD MS/MS 数据。 HRAM 全扫描和MS/MS 数据提供了分子量和碎片信息。 HCD（高能量碰撞解离）得到了丰富的 MS/MS 碎片和低质量端碎片信息。利用 Mass Frontier 软件与这些信息互相配合，我们不仅快速检测出奥美拉唑的主要杂质，而且可靠地测定了相应的元素组成，如图 1&2 和表 1所示。
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