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抗体的概念、动物产生抗体的机理及单克隆抗体...(二)

2020.5.19
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

构成抗原的条件:

一、异物性,又称为异质性或异源性

正常情况下,自身组织或细胞对机体本身无免疫原性。而异种或异体物质,以及化学组成或结构发生改变的和由于某种因素而暴露的在胚胎期与免疫系统隔绝的自身物质则为良好的抗原。

二、理化性状

大分子物质

抗原的免疫原性与其分子大小有直接关系:

1、免疫原性良好的物质分子量一般都在10000以上, 在一定条件下, 分子量越大, 免疫原性越强;

2、分子量小于5000的物质免疫原性较弱;

3、分子量小于1000的物质为半抗原, 没有免疫原性。但与蛋白质载体结合后可获得免疫原性;

抗原须为大分子物质的原因可能是:

1、抗原分子质量越大,表面特殊化学基团(抗原决定簇)就越多,因而就越能有效地刺激免疫细胞,产生免疫应答。

2、大分子抗原物质化学组成复杂、结构稳定,不易被破坏和清除,在体内停留时间较长,故可持续刺激免疫系统发生免疫应答。

一般来讲, 分子量越小, 免疫原性越弱, 甚至失去免疫原性。因分子量越小的物质越倾向于诱导细胞免疫而缺乏诱导抗体形成的体液免疫的能力。

人工合成短肽链需与大分子载体连接才能激发机体的体液免疫和细胞免疫应答。

三、化学组成、分子结构

大分子物质有时也并非一定是良好的免疫原,如分子量 99787的明胶,但因其分子结构和空间构象简单,为直链氨基酸、易降解而使其免疫原性很弱。

一般来说,分子结构和空间构象愈复杂的物质免疫原性愈强。如含芳香族氨基酸的蛋白质比含非芳香族氨基酸的蛋白质免疫原性强。

多糖分子的免疫原性则主要取决于单糖的数目和类型,并且结构复杂者免疫原性强。

如果用理化方法改变抗原的空间构象, 其原有的免疫原性也随之消失。同一分子不同的光学异构体之间也有免疫原性的差异。

抗原分子并非所有的基团都作用一致, 决定其免疫活性的只是其中的一小部分抗原区域。

抗原决定簇(antigenic determinant)是指存在于抗原分子表面的能够决定抗原特异性的特殊化学基团,是与抗体结合的位点。由于抗原决定簇通常位于抗原分子表面, 因而又称为表位(epitope) 

抗原决定簇是具有特殊立体构型和免疫活性的化学基团。

抗原决定簇决定着抗原的特异性, 即决定着抗原与抗体发生特异结合的能力。

抗原分子母体表面有不同的抗原决定簇,即具有不同的特异性, 而同一化学基团的不同异构体均可影响抗原的特异性。

功能性抗原决定簇和隐蔽的抗原决定簇

1、功能性抗原决定簇:

存在抗原分子表面,能被淋巴细胞识别,同时能与抗体特异性结合而发生免疫反应的抗原决定簇,称为功能性决定簇。

2、隐蔽的抗原决定簇:隐藏在抗原分子内部的抗原决定簇

佐剂(Adjuvan):   先于抗原或与抗原混合后同时注入动物体内,能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答,发挥辅助作用的一类物质。

佐剂作用:

保护抗原,延长其在体内的滞留时间,使抗原缓慢释放;增强机体对该抗原的特异性免疫应答;增强免疫原性。

最常用的佐剂:

弗氏佐剂(Freund’s adjuvant)是用矿物油(石腊油)、乳化剂(羊毛脂)和杀死的结核分枝杆菌(卡介苗)组成的油包水乳化佐剂,这三种成分俱全的佐剂称为弗氏完全佐剂,不含结核分枝杆菌的佐剂为弗氏不完全佐剂。

1、一只兔子每次的免疫剂量:

细胞抗原不低于1x107 ;

可溶性抗原100ug-1mg(300-800ug);

合成抗原为2mg(半抗原约为20-200ug)

2、免疫途径、免疫次数和间隔时间:

选用皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔或淋巴结内途径进行免疫,一般完全抗原免疫3-4次,合成半抗原免疫6次以上,两次免疫间隔时间一般为3周。

【一免】:抗原 300-500ul抗原(浓度为1ug/ul)+300-500ul福氏完全佐剂+适量青霉素和链霉素混合,充分乳化,兔子背腹部剪毛后皮下多点注射免疫;(免疫两只兔子)

注:抗原完全溶解后摇匀再取样;福氏完全佐剂需摇匀后吸取免疫前取少量血清,作阴性对照

【二免】:间隔3周,300ul-500ul抗原+300ul-500ul福氏不完全佐剂+适量青霉素和链霉素混合,充分乳化,兔子背腹部剪毛后皮下多点注射免疫;

【三免】:间隔3周,300ul抗原+300ul生理盐水+适量青霉素和链霉素混合,二侧腿部肌注免疫;

【四免】:间隔14天,300ul抗原+300ul生理盐水+适量青霉素和链霉素混合,二侧腿部肌注免疫;

【五免】:间隔14天,300ul抗原+300ul生理盐水+适量青霉素和链霉素混合,二侧腿部肌注免疫;

注:

① 每次免疫后取少量血清,用琼脂扩散试验或间接ELISA测定效价,一般琼脂扩散效价达1:32或间接ELISA测定效价达1:500000时可杀兔取血;

② 末免后7-10天取血放与平皿中,置37℃放30分钟,4 ℃ 放置3-4小时,待血块收缩后,吸血清到离心管,5000rpm离心5分钟,上清即为血清,1.5毫升的离心管分装-20 ℃ 保存。

淋巴细胞杂交瘤技术与单克隆抗体

Köhler和Milstein在1975年建立了体外淋巴细胞杂交瘤技术,用人工的方法将产生特异性抗体的B细胞与骨髓瘤细胞融合,形成B细胞杂交瘤,这种杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞无限繁殖的特性, 又具有B细胞分泌特异性抗体的能力, 由克隆化的B细胞杂交瘤所产生的抗体即为单克隆抗体

单克隆抗体制备原理

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