1.5.5 ELISA法检测 血清中细胞因子ILK , IFN、的浓度 取全血标本离心20分钟，取上清液进行检测，严格按eBioscienc;e公司提供的EI1SA试剂盒中的检测方法测定血清中细胞因子IL 2 ， IFN-r的浓度。用酶标仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。
1.5.6形态学观察 各组小鼠跳台实验结束后，立即处死，迅速取脑组织，并在中性福尔马林溶液中固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下观察脑组织神经元细胞形态变化。
2结果
2. 1对D-半乳糖诱导的衰老小鼠跳台实验中学习记忆的影响
测试学习能力中，与正常对照组相比，衰老组痴呆小鼠跳上跳台潜伏期明显延长，错误次数增多，有统计学意义;与衰老组对比，脑复康组和丝瓜提取物375 mg/kg,750mg/kg剂量组痴呆小鼠潜伏期和错误次数显著降低，有显著差异。在测试记忆能力中，与正常对照组相比，衰老组小鼠跳下跳台潜伏期明显缩短，错误次数增多，差别有统计学意义。与衰老组对比，脑复康组和丝瓜提取物375 mg/kg,750 mg/kg剂量组小鼠潜伏期明显延长和错误次数显著降低，有显著差异。
2. 2瓜提取物对Morris水迷宫中小鼠定位航行实验及空间探索能力实验的影响 定位航行实验中，各组小鼠逃避潜伏期随着训练时间的延长逐渐缩短;第2天实验开始，衰老组较空白组小鼠逃避潜伏期显著延长，提示小鼠学习记忆功能明显损伤。第3天实验开始，与衰老组相比，丝瓜提取物750mg/kg剂量组可显著缩短痴呆小鼠找到平台的潜伏期，丝瓜750mg/kg剂量组与脑复康比较实验5天中逃避潜伏期差异无统计学意义。衰老组与对照组相比，痴呆小鼠在平台象限的游泳时间明显缩短，绕平台所在象限穿越次数减少;与衰老组小鼠相比，丝瓜提取物375 mg / kg, 750mg / kg剂量组及脑复康组明显延长小鼠在平台象限的游泳时间，丝瓜提取物各剂量组均不同程度增加痴呆小鼠穿越平台次数，其中丝瓜提取物750mg/kg剂量及脑复康组与衰老组相比具有显著性差异。
2. 3瓜提取物对D-半乳糖诱导的衰老小鼠脑、胸腺和脾脏指数的影响与对照组比较，衰老组小鼠脑指数、脾及胸腺指数均显著减少，脑复康组及丝瓜提取物375 mg/kg,750mg/kg剂
量组小鼠较衰老组小鼠脑指数、脾及胸腺指数显著增大，没有显著的剂量依赖性。
2. 4丝瓜提取物对D伴乳糖致衰老小鼠模型脾T淋巴细胞转化功能、血清中细胞因子ILK及IFN-r的影响与对照组相比，衰老组小鼠的脾T淋巴细胞转化刺激指数(SI)降低，差异有显著性意义。与衰老组相比，脑复康组及丝瓜提取物187. 5mg/kg,375 mg/kg,750mg/kg剂量组均能提高小鼠SI，差异具有统计学意义。与对照组相比，血清中细胞因子ILK与IFN-r，衰老组IL 2,IFN-r明显降低，有统计学意义;而丝瓜提取物375 mg/kg,750m刻k}剂量组均能升高小鼠血清中ILK和IFN-r，差异具有统计学意义
25小鼠脑组织光学显微镜形态学观蔡正常对照组脑组织细胞形态规则且结构清晰、排列整齐，细胞数口较多，无变性细胞。衰老模型组小鼠脑皮层变薄，脑细胞数量明显减少，排列紊乱，着色不均匀，部分核固缩，形态发生改变，可见空泡样变化。与模型组比较，脑复康组及丝瓜提取物375 mg/kg,750mg/kg剂量组虽有轻度的细胞肿胀，但细胞形态结构完整，排列整齐，数量也增多，187.5 mg/kg剂量组有少量的空泡样变化，丝瓜提取物187.5 mg/kg,375 mg/kg,750mg/kg剂量组小鼠脑组织细胞的数量和排列均明显得到改善
3讨论
衰老是生命过程的一个必经阶段，主要表现为机体对环境的适应能力减弱以至丧失，出现多种器官组织功能的衰退。衰老和延缓衰老的研究成为世界各国解决老年问题的热点前沿
研究衰老和痴呆的动物模型很多，给小鼠注射D-半乳糖已成为常见的模拟衰老动物模型的方法，广泛用于阿尔兹海默病(AD)等神经退行性疾病的药理研究[l0} o Morri、水迷宫的定位航行实验反映小鼠的空间认知能力;空间探索实验则反映小鼠空间记忆的能力。
结果表明，丝瓜提取物明显缩短定位航行实验中小鼠的逃避潜伏期，空间探索实验中明显延长小鼠在原平台所在象限的游泳时间，增加其穿越平台次数。跳台实验属于被动回避性反射，可以考察药物对记忆全过程的影响，同时测定药物对逃避潜伏期和安全平台期的影响，可以排除药物非特异性作用的干扰[U i7实验结果显示模型组小鼠跳台实验中学习前和学习后潜伏期缩短、错误次数增加。丝瓜提取物各剂量组延长跳台实验中学习前和学习后潜伏期、减少错误次数，改善衰老小鼠的学习记忆能力，成绩明显优于模型组。在行为学层而证明了丝瓜提取物可改善记忆的能力。光镜观察脑组织形态学显示，丝瓜提取物187. 5mg/kg,375mg/kg,750mg/kg剂量组小鼠皮层细胞数量明显增多，细胞结构改善明显，丝瓜提取物有可能通过维持细胞形态结构，减少脑神经细胞的衰老或凋亡，保护脑功能达到延缓衰老的作用。
衰老的免疫学说认为，免疫器官老化，免疫细胞及细胞因子发生改变，机体的免疫功能逐渐减弱，这些增龄性变化导致机体衰老和死亡率增加[U.. isl。组织器官的重量，特别是脑、胸腺、脾、肝、i i}F9等重要器官的重量变化是反映机体衰老程度的重要指标[Ua.isl胸腺是T淋巴细胞分化成熟的场所。脾脏参与体内的多种免疫功能。老年机体的免疫功能的降低与T细胞的变化关系很大。根据淋巴细胞转化率的高低，可判断机体的细胞免疫功能状态;白介素2 (ILK)和:干扰素(interferon gam-ma } IFN-r)都是主要由活化的T淋巴细胞产生的细胞因子，具有强大的免疫调节作用。IL一具有促进T细胞增殖分化，增强T细胞、NK细胞活性，诱导干扰素生成的作用。IFN-r可增强抗原提呈细胞与T细胞的相互作用，进而增强T细胞辅助抗体产生，可活化巨噬细胞，促进其杀伤病原体和肿瘤的能力，并可活化NK细胞，提高其杀伤能力。ILK和IFN-r水平的高低是机体细胞免疫的重要标志[U sl。本实验结果显示模型组小鼠各项免疫指标异常，免疫器官萎缩、功能减退，淋巴细胞转化能力降低，外周血IL一含量降低，较好地反映了衰老的病理生理特征。丝瓜提取物能提高衰老模型组小鼠脾淋巴细胞转化刺激指数，升高血清中ILK和IFN-r浓度水平，能显著增强衰老小鼠细胞免疫功能。
综上，丝瓜提取物可以改善衰老小鼠的记忆功能及保护细胞结构功能，有保护免疫器官、提高血清中IL一和IFN、的水平及T淋巴细胞的增殖活性作用，并可能通过增强机体体液和细胞兔疫功能而起到延缓衰老的作用。
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