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报告基因分类及优缺点

2020.5.25
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,其表达产物非常容易被鉴定。把它的编码序列和基因调节序列相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。

作为报告基因必须具备的条件:

(1)全序列已测定

(2)表达产物在手提细胞中不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物

(3)其表达产物能够进行定量测定

报告基因的种类很多,根据对其表达产物的分析检测方法的不同,可将其分为体外报告基因和体内报告基因。前者的分析需要在含有报告分子的细胞裂解液或细胞、组织培养液(分泌型报告基因)中进行报告分子的定量。较典型的有氯霉素乙酰基转移酶基因(CAT)、人生长激素基因(hGH)及分泌型碱性磷酸酶基因(SEAP)等。后者的分析可以在活的细胞或组织中,或在已经组化固定的组织或细胞中进行。较典型的如绿色荧光蛋白基因(GFP)。而β-半乳糖苷酶基因(β-Gal)和萤火虫荧光素酶基因既可以在体外分析也可以在体内分析。

常用的报告基因系统:

√ 半乳糖苷酶报告系统

√ 荧光素酶报告系统

√ 荧光蛋白报告系统:

绿色荧光蛋白(GFP)

    可溶性蛋白,性质稳定;

    荧光基团相当明亮;

    荧光在活细胞中即可观察,不需要固定和组织加工;

    GFP基团和目的基因做成融合蛋白后,可以通过转染的方法在细胞中稳定表达;

    表达GFP融合物的细胞能够在生活状态进行实验和检测。

报告基因

优点

缺点

氯霉素乙酰转移酶基因 (CAT)

在哺乳动物中没有内源性活性;可用自动化的ELISA方法检测

线性范围窄;灵敏度相对较低;需要使用放射性同位素

β-半乳糖苷酶基因(β-Gal)

蛋白稳定;生物或化学发光检测灵敏;不需要使用同位素

在哺乳动物细胞中有内源性活性

人生长激素基因(hGH)

属于分泌型报告蛋白;操作简便

灵敏度相对较低;线性范围较窄

分泌型碱性磷酸酶基因(SEAP)

化学发光检测法非常灵敏;线性范围较宽;价格便宜

在某些细胞中具有内源性表达;与筛选的化合物相互干扰

荧光素酶基因(Luciferase)

灵敏性好;线性范围宽;没有内源性表达;测定方法简便

蛋白的半衰期较短;常规分析重复性差       

绿色荧光蛋白基因(GFP)

自发荧光(不需要底物);没有内源性表达;有多种突变体可应用

需要翻译后加工;敏感性较低(没有信号的放大) 


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