应用FLIPR 钾离子通道检测试剂盒对hERG通道阻断...（二）

应用FLIPR 钾离子通道检测试剂盒对hERG通道阻断剂特性的分析

电生理实验

为便于结果比较，所有同样的hERG 通道阻断剂均在IonWorks Barracuda1 全自动膜片钳系统进行了检测得到相应的IC₅₀ 值（图4）。为观察化合物的频率依赖性效应，电压刺激命令均以0.1Hz 频率在加样前后分别刺激5 次。第五个电流信号记录的sweep 中hERG 尾电流峰值被用来测定化合物效应。

结果

应用FLIPR钾通道检测试剂盒对七个已知的hERG 阻断剂的效应进行评估。量效反应曲线见图5。IC₅₀ 值与IonWorks Barracuda 全自动膜片钳系统检测的IC₅₀的比较见表1 两者具有很好的相关性。

另外，其中3 个化合物被用于评估比较另一种基于铊离子的试剂盒——FluxOR 钾离子通道试剂盒（图6）。两者所得到的IC₅₀ 值很接近，具体见表2。然而，FLIPR 钾离子通道检测试剂盒的信号窗口是的2.25（基于信号与基线的比例），这一数值显著高于FluxOR（信号窗口是0.5）。表明了FLIPR 钾离子通道检测试剂盒的实验结果更精确、更可靠。阴性对照是4μM 特非那定对hERG通道的阻断效应，阳性对照是刺激性缓冲液对hERG 通道的效应。更低的空间差异和更大的信号窗口产生了更大的Z因子值，见图7。这可能源于FLIPR 钾离子通道检测试剂盒是真正的均相实验体系且是免洗的或无需更换培养基，从而显著减小了孔间差异性。

结论

FLIPR钾离子通道检测试剂盒 采用均相 免洗 的实验方案检测钾离子通道功能活性。 在本文中，我们应用 了 hERG通道阳性抑制剂验证了 FLIPR钾离子通道检测试剂盒和电生理方法得到的结果是高度相关。

在另个单独运行的实验中， 相比于其它同类型试剂盒来说， FLIPR钾离子通道检测试剂盒 表现出了显著性更高的 信号窗口以及Z因子值。 明显提升的实验 结果表现 ，结合 FLIPR^Tetra系统的高通量性能，在 药物研发早期阶段将为究者提供一种强大的 hERG风险评估分析平台。