分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

核转位筛选实验(二)

2020.6.02
头像

王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

利用交互式的灵活的软件分析数据

MetaXpress® 软件中的Translocation-Enhanced 应用模块可以被用来鉴定核中以及定量与细胞核相关的其余部分中ß-catenin-EGFP 的量(图3)。对细胞核区间的划分来源于被Hoechst 核染料染色的区域。然后用第二种波长的光(EGFP)将细胞划分出新的区间,这一区间的大小和宽度可以满足特异性的检测。这保证了每个区间都有足够的绿色荧光强度,如细胞核,细胞质和细胞膜都可以进行定量分析。交互式模块随着参数的调整可以及时的反馈信息,这也使我们能对每个特定的检测结果进行准确分析。

 

2015527144213925.jpg

图3 应用Translocation-Enhanced 分析模块,根据核染色确定核区域及细胞质区域(上)。MetaXpress 软件支持自由调整设置参数,从而精确圈定出各组分的范围,通过评分得到阳性或阴性结果(下)。

 

MetaXpress®软件的Translocation-Enhanced应用模块可以通过一系列的算法将细胞的计分标准规范化。除了检测特定细胞区域所有检测波长下每个细胞和图像的平均以及总体的荧光强度,系统还可以从整个细胞区域中两种染料的荧光强度计算出皮尔森相关系数。系数的范围从-1(负相关)到1(完全相关)。在这个例子中,可以看到核与ß-catenin-EGFP 高度相关(图4)。随后,通过计算核区域和胞质平均荧光强度的比率可以得到剂量效应曲线(图5)。检测结果的稳定性可以通过计算z 值来评估。

 

2015527144237840.jpg

图4 应用Translocation-Enhanced 分析模块,DMSO 处理的阴性对照和MG132 处理的阳性对照依据转位情况产生蒙板,若计算出的皮尔斯系数大于0.5 被记为阳性,图中显示为绿色,若小于0.5 则为阴性,显示为红色。

 

高通量方法检测蛋白转位

这种通过检测待测化合物影响相关信号通路从而干扰.-catenin 运输的技术仅仅是高效检测细胞间运输情况的一个特例。即使低倍率放大,也可得到高质量图片的技术,可以从统计意义上对相关化合物进行准确的测定。将细胞水平上的报告基因检测技术和Molecular Devices 提供的高通量筛选技术结合在一起,实验者就可以完美解决细胞不同区域间的蛋白运输活动的测定。

 

2015527144259574.jpg

图5 浓度相关曲线如图所示,左为阳性化合物MG132,右为样品化合物A。根据细胞核和细胞质的平均荧光强度比值得出IC50。阳性化合物的Z 值大于0.7 说明实验重复性好。


互联网
仪器推荐
文章推荐