BioTNT mRNA 引物筛选，引物定制或specific primers的使用说明
版本号：20100001
BioTNT qPCR Primer Assay for specific mRNA genes
目录号：SER-PCR –编号（500T）;
说明书 Part A
一、产品简介：
本试剂盒是基于最可靠的SYBR® Green-based定量real-time PCR试剂盒并应用基因表达分析。
我们的实验为基因特异性定量PCR验证具有统一、高效和标准化特点的扩增反应条件。
每一对引物都是经过严格的实验验证的。
已经使用适当的real time PCR Mix的时候，合适的片段大小和高的扩增效率成为保证。
qRT-PCR Primer pair kits统一的扩增效率和条件为荧光定量pcr实验中多基因表达的检测提供了准确而灵活的解决方案。
完整的试剂盒说明书由part A 和Part B构成。Part A 主要描述了本试剂盒的使用方法和注意事项，Part B主要注明了assay 的特异情况。
二、产品特点：
本产品适用于有一定q PCR实验经验的客户或者无经验的客户在公司的技术指导下进行。
三、保存条件：
可在常温下运输。常期保存请在-20℃保存，效期12个月。
警告：本产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等其他用途。
安全提示：本产品中部分试剂有腐蚀性或毒性，请勿直接接触皮肤或吞咽；操作时请穿戴实验服、防护镜和手套；如果接触皮肤，应立即用洗涤剂和大量清水冲洗；误食或其他危急情况，请及时到医院就治；部分试剂易燃，请注意消防安全。
四、注意事项：
请在收到此试剂盒后立刻检查试剂盒组成，BioTNT 公司只负责受理在试剂盒签收后三个工作日内的试剂缺失报告；
五、试剂盒组成：
|
试 剂 |
说 明 |
T |
|
qPCR上游引物 |
10× |
1ml （500T） |
|
qPCR下游引物 |
10× |
1ml （500T） |
其他特点请参照Part B。
六、保证结果可使用的qPCR试剂：
BioTNT real time PCR Premix 货号：A2010A0112
七、其他需要自己准备的：
1、 耗材：0.5 mL或1.5mL Eppendorf管（无菌、无酶、RNase-free；货号），Tips(RNase-free)（1000μL、200μL、10μL的枪头；）；
2、 检测的样本CDNA；
3、 无菌无酶的 PCR 水（货号：A2010B0X03）；
4、 离心机；移液器（10μL ，200μL，1000μL）；
5、 手套，口罩。
八、预防RNase污染，应注意以下几个方面：
1、 经常更换新手套，以防止RNase污染；
2、 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染；
3、 RNA在Rrizol试剂中时短时间内不会被RNase降解，但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料或玻璃器皿（玻璃器皿可在150℃烧烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用DEPC水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase）；
4、 配制溶液应使用RNase-free ddH2O（货号：A2010B0X03）
九、操作步骤：
1、 请混匀所有的试剂（15秒）；
2、 请按以下配比对每个反应配20μL的体系：
|
反应液组份 |
用于荧光PCR实验 |
||
|
加量 (μL) |
终浓度 |
备注 |
|
|
Real time PCR Premix试剂混合物 |
10 |
1× |
货号： |
|
上游引物（10×） |
2 |
1× |
|
|
下游引物（10×） |
2 |
1× |
|
|
待检DNA样品 |
1 |
用户提供* |
|
|
PCR水 |
5 |
||
|
总体积 |
20 |
*注意：如果您的cDNA模板不是使用BioTNT的cDNA第一链合成试剂盒（货号：A2010B0B01，A2010B0B02）进行逆转录合成的，请适当的调整cDNA的用量（1-6μL），调整无菌去离子水的用量，使总体积保持20μL；
*注意：如果您不使用BioTNT real time PCR Premix，请做引物浓度梯度实验，以使实验达到最佳效果；
*注意：建议MIX引物、标本与PCR水预混，在实验操作中尽量避免使用移液器的最小量程，尽量减少加样次数，以减少因加样而导致的误差。在操作中，应使用不含荧光物质的一次性手套(经常替换)、移液器头(带滤嘴自卸式)，不能用手直接触摸PCR反应管/条/板。
*注意：如果使用其他体积的体系（5-50μl），应保证终浓度与说明书上的终浓度一致。配制反应体系时，应注意移液器的使用方法，所有的液体都要缓慢加至管底，不要加至管壁，所有液体的混匀要用振荡器进行，不能用移液器吹打，避免产生气泡。如果产生气泡，请用手指将气泡弹破，再低速离心。反应体系配制完毕后低速离心数秒，立即进行PCR扩增。
*大多数仪器建议采用20ul体系；Roche的lightcycler 和ABI 7900，stepone plus，viia7 等可以采用10ul体系；
*建议每个样本同一个基因做双重复或者三重复；
*设立阴性对照(即加样品的时候用水来代替);
*建议购买BioTNT 的阳性对照( 货号: A2010B0X10 ); 并在实验中设立阳性对照;
首页
