普瑞邦伏马毒素检测方案介绍
（一） 免疫亲和柱-高效液相色谱法：符合GBT 25228-2010 粮油检验 玉米及其制品中伏马毒素含量测定 免疫亲和柱净化高效液相色谱法
Pribolab®（普瑞邦）应用免疫亲和柱净化，利用高效液相色谱仪和荧光检测器检测可提供伏马毒素测定的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，是一种很好的检测伏马毒素的方法，仅供广大用户参考。
1. 设备和耗材配置
序号 | 品名 | 规格及参数 | 数量 | 用途 |
1 | 高效液相色谱仪 | 一台 | 分析检测 | |
2 | 荧光检测器 | 一台 | 读取荧光信号 | |
3 | Pribolab真菌毒素专用色谱柱 | 150/250mm 货号：PRC-18 | 一支 | 配套各类色谱仪，霉菌毒素检测用 |
4 | PriboFast®伏马毒素免疫亲和柱 | 3ml，25支/盒， 货号：IAC-050-3 | 若干 | 高特异性，纯化样本 |
5 | 高速均质器 | 达到22000rpm 以上，货号：EQ-WR-1L | 一台 | 耐腐蚀，高速，均质 |
6 | PriboFast®玻璃纤维滤纸 | 100P,110mm，1.5μm 货号：GMF-110 | 一盒 | 霉菌毒素专用过滤 |
7 | PriboFast®八位泵流操作架 | 货号：EQ-PUMP-8 | 一台 | 用于控制免疫亲和柱过柱流速 |
8 | 伏马毒素标准品 | 50µg/ml伏马毒素B1, 50µg/ml伏马毒素B2溶于乙腈/水（50/50）, 货号：STD#2011 | 1ml | 用于定量分析标准品的配制 |
2. 样品前处理:普瑞邦为饲料提供不同的处理方案(详细方案请联系普瑞邦，普瑞邦开发了针对多种饲料基质提供优化的处理方案)
样品处理：
花生，玉米，大米，小麦及其制品和饲料
----将50 g 研磨的样品 + 5g盐置于均质杯中。
----加入100mL 甲醇：水（80：20）溶液。
----盖上杯盖，高速均质5分钟。
----4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤；
----取10mL滤液并加入40mL PBS溶液将滤液稀释，混匀。用玻璃微纤维滤纸过滤，取稀释后液体待测；
----将上步稀释液通过微纤维滤纸过滤，滤液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL。
3. 免疫亲和柱净化:
操作程序：符合GB/T 25228-2010国标方法
----将免疫亲和柱连接于泵流操作架的10mL注射器下。准确移取10mL样品提取液注入注射器；
----富集:将空气压力泵与注射器连接，调节压力使提取液以约2-3mL/min(1滴/3秒)流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2-3mL空气通过柱体；
----洗涤: 用10mL 0.1%的吐温/PBS清洗，再以10mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2-3mL空气通过柱体；
----洗脱可采取以下方式之一进行: 优选2
----洗脱1: 准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,孵育30秒以上(孵育即甲醇在柱子中浸泡),然后以流速为1-2mL/min过柱，收集全部洗脱液供检测用。
----洗脱2: 为保证洗脱充分,建议以1.5mL色谱甲醇分两步进行洗脱，流速为1-2mL/min(1滴/秒,重力即可) 。首先，加入0.5ml甲醇洗脱，重力过柱，当溶剂通过柱子后，等待30秒后再加入1ml甲醇进行洗脱，过柱前孵育30秒以上(孵育即甲醇在柱子中浸泡)。收集全部甲醇洗脱液供衍生化反应用。
4. 衍生化反应
分别取净化后的样本液和标准工作溶液各50ul，分别置于1ml的各个试管中，各加入50ul OPA衍生液，涡流混合器上混合30s，静置3min后，立即取20ul衍生液进高效液相色谱仪分析。
5. 高效液相色谱分析
HPLC-色谱柱 ：C-18色谱柱 150 x 4.6 mm;
流 动 相 ：甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钠溶液 77:23
流 速 ： 1 mL/min
柱 温 ： 室温
进 样 体 积 ： 20μL
荧光检测器：λ-激发波长：335nm λ-发射波长：440 nm
HPLC配置：高效液相色谱仪带有荧光检测器
温馨TIPS：
1. 谷物、饲料中真菌生长繁殖的有利条件主要是适宜的温度与水分。如能将谷物、饲料等贮存于10℃以下，水分保持在10％以下，就能有效地防霉。
2. 从事真菌毒素科研及检测的人员，必须注意防护，如穿戴隔离衣帽，在进行真菌分离培养工作时，应戴口罩，并尽量防止孢子飞扬。
3. 操作台面如有漏溅，应立即用新配的5％次氯酸钠消毒。以5％次氯酸钠（NaOCl）处理时，黄曲霉毒素于数秒钟内即被破坏，故是常用的消毒剂。
4. 也有应用生物学方法解毒的报道，生物学方法成本低，收效大，可能是一种有前途的除毒措施。
鉴于霉菌毒素对人体的危害，提醒各位奋斗在抗毒一线的老师们一定要注意保护自身安全哦！
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