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NanoString技术检测微创穿刺样品蛋白表达

2020.6.16
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

NanoString技术由于其高灵敏度,高重复性并且检测过程中不需要进行反转录和扩增,一经推出便受到了广泛的关注和认可。现在这项技术广泛的应用在基因表达(mRNA),小RNA(miRNA),拷贝数变异(CNV),长链非编码RNA(lncRNA)等方面的检测,但是这些检测的对象都是核酸,对于细胞蛋白的表达还无能为力。最近,在Science Translational Medicine 杂志上刊登了一篇题为“Cancer Cell Profiling by Barcoding Allows Multiplexed Protein Analysis in Fine-Needle Aspirates”的研究论文,报道了Adeeti V. Ullal和他的同事开发的一种基于NanoString技术的新的检测蛋白质表达的方法。该方法利用NanoString技术的高灵敏度和不需反转录的特点,可以准确的检测用微创穿刺(Fine-needle aspirates,FNAs)方法取得的微量样本中的细胞表面蛋白的表达情况。

在理想的状况下,临床样本应该在疾病发展不同阶段连续取材,用以跟踪关键蛋白的变化情况。但是这种取材方式费用高,损伤大。而用微创穿刺方法则可以进行连续的取材,但是由于这种方法取到的细胞数量很少,限制了可分析蛋白的数量。尽管复用流式细胞仪(multiplexed flow cytometry)和质谱流式细胞技术(mass cytometry)可以用于检测少量的细胞。但是,复用流式细胞仪由于光谱重叠,可以检测的标志物(marker)很有限。而质谱流式细胞技术在样品制备过程中会损失很多的样品,因此这两种技术都不适用于检测微量样本来源的蛋白质组信息。

Adeeti V. Ullal和他的同事设计ABCD检测平台(antibody barcoding with photocleavable DNA,ABCD)该平台用一种带有DNA标签的抗体对细胞表面蛋白进行检测,这种DNA标签由一段化学性质稳定且可被光裂解的小分子连接片段连接到抗体分子上,这样每一种蛋白对应唯一的一种抗体,每一种抗体对应唯一的DNA标签,我们只需要检测DNA标签就可以知道细胞表面蛋白的表达情况。在与目的细胞结合后,洗去多余未结合的抗体,并且用光脉冲把DNA标签解离下来,再用NanoString提供的报告探针和捕获探针进行检测,就可以得到目的细胞蛋白的表达情况。而其他的一些技术,例如测序、qPCR等也可以用于这种方法的检测,但是测序和qPCR会产生由扩增偏好(amplification bias)所导致的误差,而NanoString技术不需要扩增的特点可以很好的还原蛋白表达情况因此被该研究所选用。他们用该技术对乳腺癌细胞系和肺癌临床样本进行了检测,发现同一癌肿内部的细胞样本蛋白表达的非均一性以及不同病例间蛋白表达的非均一性很高,说明同一癌肿内部和不同病例间的细胞个体差异很大,因此该技术可以为肿瘤患者的预后预测和肿瘤的个体化医疗提供依据。

 

图:技术原理

A. 细胞分离;B. 带有DNA标签的抗体与细胞共同孵育;C. 光脉冲使DNA标签解离下来,用报告探针和捕获探针检测DNA标签,得到蛋白表达情况。

具体内容请参考原文:http://stm.sciencemag.org/content/6/219/219ra9.short


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