分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

核蛋白的免疫荧光定位实验

2020.6.22
头像

王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

免疫荧光技术又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种免疫荧光技术。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。

实验方法

免疫荧光定位法

实验方法原理 免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针,检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗体),形成的抗原抗体复合物带有荧光素,在荧光显微镜下,由于受高压汞灯光源的紫外光照射,荧光素发出明亮的荧光,这样就可以分辨出抗原(或抗体)的所在位置及其性质,并可利用荧光定量技术计算抗原的含量,以达到对抗原物质定位、定性和定量测定的目的。

实验材料 核蛋白 

试剂、试剂盒 甲醇 PB 一抗 二抗 

仪器、耗材 显微镜 玻片 盖玻片 滴管 

实验步骤 1.  在22×22 mm 的1.5号盖玻片上培养细胞。理想条件下细胞应长到50%~70%汇合。

2.  在-20℃用100%甲醇固定细胞3分钟。

3.  用PBS + 1% NGS洗三次,每次10分钟。

4.  在湿盒里以适当浓度的一抗室温温育1小时。

5.  用PBS + 1% NGS洗三次,每次10分钟。

6.  在湿盒里与稀释为4 ug/ml 的荧光标记二抗室温温育1小时。

7.  用PBS洗四次,每次10分钟。

8.  用封片剂将盖玻片封在载波片上,用干净的指甲油将盖玻片封边,防止盖玻片滑动。

注意事项 1.  要在盖玻片一边角落做记号,以知道细胞在盖玻片的那一面。

2.  一抗的浓度需要经过实验摸索确定。

3.  第四步中如果用22×22 mm 盖玻片,则在盖玻片上加30 ul 稀释的抗体,并且将盖玻片倒置在玻璃载玻片上,然后将载玻片放到湿盒里,在室温温育


互联网
仪器推荐
文章推荐