1.组织用4%多聚甲醛固定6-8小时，转至20%蔗糖溶液至组织沉底。
2.冰冻切片8-10μm，推荐瑞沃德冷冻切片机，温度稳定，切片质量高。室温放置30分钟以上防脱片，-20℃保存。从冰箱拿出的冰冻切片在室温放置30分钟以上再进行免疫荧光。
3.1xPBS洗3次，每次3-5分钟。
4.用2%BSA室温或37℃封闭1小时。
5.一抗4℃孵育过夜。1xPBS洗3次，每次3-5分钟。
6.二抗室温或37℃，避光孵育1小时。1xPBS洗3次，每次3-5分钟。
7.DAPI染色。1xPBS洗3次，每次3-5分钟。
8.滴加防淬灭剂，封片。
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