禽甲型流感病毒的分离和采集

最近几天，H7N9的案例让人们不禁发出“禽流感又来了！”的感叹。

其实，禽流感跟人流感一样，它一直都没走，并时常在禽群里发生。而它的可怕之处不在于它一直的存在，而在于它“不断的变异”和“从不传染人，到禽传人、人传人”。

流感病毒可分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型。其中，甲型流感依据流感病毒特征可分为H×N×共135种亚型，H7N9亚型禽流感病毒是其中的一种。禽甲型流感病毒除感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。可感染人的禽流感病毒亚型为H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3，此次报道的为人感染H7N9禽流感病毒。

禽甲型流感病毒颗粒呈多形性，其中球形直径80～120nm，有囊膜。基因组为分节段单股负链RNA。依据其外膜血凝素(H)和神经氨酸酶(N)蛋白抗原性不同，目前可分为16个H亚型(H1～H16)和9个N亚型(N1～N9)。该病毒为新型重配病毒，其内部两个基因片段来自禽间H7N9病毒，还有6个来源于禽间的H9N2病毒，没有猪的基因片段。

如何在人群中预防和检测H7N9病毒不是本文目的，本文主要说明如何借用实验室设备从病禽组织样品分离毒株以及从禽舍空气采集禽甲型流感病毒。

从病禽组织样品分离禽甲型流感病毒：

1. 取病禽肺组织200mg，放入CK28研磨管中

2. 加入TE缓冲液1ml

3. 在Precellys24生物样品均质器上按照参数“6500rpm，30s， 2cycles”处理

4. 5000rpm离心取上清（禽甲型流感病毒即存在于上清中，可用于PCR检测）

从禽舍空气采集禽甲型流感病毒：

1. 准备Coriolis μ空气生物采样器及LTM套件

2. 在进样瓶里添加TE缓冲液并连接采样杯

3. 设置200 L/min采样速率采集1hr

4. H7N9病毒即存在于采样杯液体中，可用于PCR检测

注：Coriolis μ空气生物采样器须选配LTM套件才能有效用于禽甲型流感病毒采集；采集时间不少于1hr；因病毒在溶液里超过30分钟就会失活，建议尽快进行下游PCR实验。