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小鼠甲状腺素(T4)elisa试剂盒使用说明

2020.6.29
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

使用目的

本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中甲状腺素(T4)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠甲状腺素(T4)水平。用纯化的小鼠甲状腺素(T4)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入甲状腺素(T4),再与HRP标记的甲状腺素(T4)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的甲状腺素(T4)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠甲状腺素(T4)浓度。

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融;

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

标准品的稀释:

加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀;

温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟;

配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用;

洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干;

加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外;

温育:操作同3;

洗涤:操作同5;

显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟;

终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色);

测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。


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