【实验步骤】

1.       将200μL已稀释的校准品、质控品和样本加到相应的微孔中。

2.       用封板片封板，室温下（18-25℃）孵育1小时

3.       揭去封板片，弃去反应液，用稀释后的洗涤液洗板3次（250μL/孔/次），最后通过拍板拍去残留的液体

4.       将200μL已稀释的酶联物加到每个孔中

5.       用封板片封板，在室温下（18-25℃）孵育1小时

6.       重复步骤3

7.       将200μL  TMB底物液加到每个孔中

8.       室温(18-25℃)孵育30分钟

9.       按加TMB底物液的顺序，将50μL的终止液加到每个孔中，轻轻混匀

10.   在加入终止液后10分钟内，用酶标仪在450nm±10nm处读数。

【结果的计算】

1.       标准曲线方法

在半对数纸上（或者使用自动化仪器）以每个标准品的OD值为Y轴，相应的浓度为X轴做出标准曲线，推荐使用4参数逻辑函数（Y=d+(a-b)/(1+(x/c)^b)）。

样本的浓度应当直接从标准曲线中读取，如果有稀释，则在计算中应该乘以稀释倍数，如果样本的浓度过高，则需要按照实验前设置说明稀释样本。

2.       一点标定法

（1）       样本浓度的手册检测

需要使用用校准品4、质控血清和样本各自的平均OD值。校准品4的OD必须要在指定的范围内（见一点标定法评估表）。每次检测都必须计算检测特殊的校正因子。校准品4的理论OD值都是按特定批次检测得出的（见一点标定法评估表）。将质控血清和样本的OD乘以校正因子：

质控血清和样本浓度可以从批次参考曲线中读出。

例子：

校准品4的理论OD值                  OD=1.377

校准品4的检测OD值                  OD=1.273

校正因子F                             F=1.082

样本的检测OD值                      OD=0.937

样本的校正OD值                      OD=1.014

读取浓度                         0.5VIEU/mL

（2）       脑脊髓液样本浓度的计算（一点标定法软件）

打开名为“One Point Calibration TBE IgG Liquor”的Excel文件，将QC证书的下列指标填到Excel中：

校准品4的理论OD值

校准品4的OD范围

临界1和临界2的理论OD值

临界1 OD=灰区的最低点

临界2 OD=灰区的最高点

填入检测到的校准品4平均OD，将脑脊髓液样本的鉴别和OD插入到已准备好的计算单中。脑脊髓液样本的求值和OD都会自动完成。

【结果的判定】

血清/血浆

＜63VIEU/mL         阴性

63-126VIEU/mL       灰区

＞126VIEU/mL        阳性

脑脊髓液

OD＜临界1理论OD                      阴性

临界1理论OD＜OD＜临界2理论OD       灰区

OD＞临界2理论OD                      阳性

【结果的说明】

1.       疫苗

通过检测血清血浆中的抗TBE的IgG抗体来证明血清转化

（1）       抗TBE IgG阴性

接种疫苗后无血清转化

（2）       抗TBE IgG 灰区

可能有血清转化，建议在2~4周内再次检测

（3）       抗TBE IgG阳性

接种疫苗后有血清转化

2.       感染

（1）       抗TBE IgM和抗TBE IgG 阴性    

无感染

（2）       抗TBE IgM阴性和TBE IgG 阳性  

这可能是潜在的免疫或者是几周或几月之前的感染

（3）       抗TBE IgM阳性和TBE IgG阴性

可能有新近感染

（4）       抗TBE IgM和抗TBE IgG都阳性

有感染

本译文仅供参考，详情请以原文为准。