xCELLigence系统实时监测低毒性X-tremeGENE DNA转染实验（一）

前言

X-tremeGENE DNA Transfection Reagent是一种非脂质体、多组分转染试剂，已被证明可有效转染多种细胞。X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP在有无血清条件下均可进行转染，且细胞毒性低，转染后无需更换培养基。

降低转染试剂本身的脱靶效应是非常重要的：

■   在长时间内保证转染目标基因的高表达率

■   减少死细胞数目及其释放的蛋白酶，能高表达未被消化的目的重组蛋白。

■   获得同转染目标基因生物相关的结果

本研究中，在Hela细胞上进行了X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HPTransfection Reagent的细胞毒性和转染效率检测，并与其他试剂进行了比较。

步骤

■   细胞毒性使用xCELLigence RTCA MP仪器进行检测，通过测定电阻抗，可长时间、无标记、动态监控细胞生理活动，包括细胞黏附、伸展、增殖、死亡以及其他形态变化。新推出的配套耗材E-plate VIEW 96每个孔下部有0.5mm透明的窗口，可完成可视化的精微检查。

■  罗氏自动化图像捕获和分析系统Cellavista，其为结合可见光和荧光成像优点的全自动、高通量精微细胞图像分析工作站，在实验中观测细胞形态学变化和检测转染效率。

■  细胞代谢活动可由WST-1细胞增殖试剂盒分析检测，定量活性细胞的代谢活力。

结果

细胞毒性

■  xCELLigence RTCA MP仪器的连续监测显示，使用X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent在Hela细胞上转染GFP表达质粒，与未处理对照组的细胞指数（Cell Index, CI）值是相似的（图1）。而其他试剂在转染5个小时后，细胞指数值有明显的下降，表明存在细胞毒性。

图1: 使用X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP Transfection Reagent及其争转染试剂在Hela细胞上转染GFP表达质粒后，xCELLigence 检测的细胞指数变化曲线图。

图2：Hela细胞转染后的形态。可见光图像由Cellavist仪器获得（10倍放大）

■  Cellavist可视化检测细胞形态，转染24h后获得可见光成像图。X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP转染的Hela细胞呈现健康状态，而其他试剂组则存在大量死亡细胞（图2）。