试剂和器材：
1. OptiPrepTM（600g/L的碘克沙醇）；
2. 匀浆介质：0.25mmol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、20mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；
3. OptiPrepTM稀释液：0.25mmol/L蔗糖、6mmol/L乙二胺四乙酸、120mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；
4. 碘克沙醇（500g/L）工作液（IWS）：5体积OptiPrepTM +1体积OptiPrepTM稀释液；
5. 按要求向匀浆介质和OptiPrepTM稀释液中加入蛋白酶抑制剂；
6. 使用匀浆介质制备好的轻线粒体组分；
7. Dounce匀浆器（宽松配制，Wheaton B型）；
8. 两室梯度制备仪或Gradient MasterTM；
9. 5ml规格注射器（内径大约为0.8mm），带金属套管针；
10. 超速离心机，配有吊桶式转子（离心管容量为17ml）；
11. 梯度收集器，用来首先收集低密度或高密度的梯度液；
实验方法：
原代细胞培养后，所有操作均在0—4℃下进行。
1. 使用匀浆介质稀释碘克沙醇工作液，获得碘克沙醇浓度为190g/L及270g/L的梯度溶液，将溶液置于冰上；
2. 使用宽松配制的Dounce匀浆器（用研杵研磨2—3次），在3.0ml的匀浆介质中重悬轻线粒体沉淀；
3. 使用碘克沙醇工作液将混悬液碘克沙醇浓度调整到300g/L；
4. 使用两室梯度制备仪或者Gradient MasterTM从两种梯度溶液中各取6ml来制备线性梯度，置于可在吊桶式转子中离心的管中；
5. 使用注射器和金属套管针在梯度溶液下铺入3—4ml在第3步制备的混悬液；
6. 在梯度溶液顶层铺1—2ml匀浆介质使得管中液面离顶部大约3mm，在适宜的吊桶式转子中以大约70000g离心1.5—2h；
7. 可以用密度高的介质来向上取代或者在凹液面上吸出来的方法先收集梯度溶液中1ml低密度部分。或者，通过管刺破或小心地用细的金属套管针探入管子的底部（与蠕动泵连接）来先收集密度高的组分
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