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酶消化法从Wharton胶中分离干细胞

2020.7.13
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

试剂和材料:
1. 培养基:完全LG-DMEM:含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM,添加10%热灭活胎牛血清,100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素;
2. PBSA;
3. 胰蛋白酶,2.5%;
4. 胶原酶A,0.1%用PBSA配制;
5. 培养瓶;
6. 圆锥形离心管,50ml;
7. 剪刀;
8. 镊子;

实验方法:
1. 脐带取材后,可在PBSA中保存1-24h;
2. 除去血管,将Wharton胶剪成大约0.5cm的小组织块;
3. 将剪碎的组织块转移到50ml离心管,用无血清DMEM洗,室温250g离心5min;
4. 倒掉上清液,将离心后的沉淀物拍散,浸泡在0.1%胶原酶(大约是沉淀物体积的3倍)中,37℃消化16-18h;
5. 加入适当体积的PBSA(消化液体积的2倍),室温250g离心5min;
6. 倒掉上清液,加2.5%胰蛋白酶(大约是沉淀物体积的2倍)37℃处理30min,轻轻搅动;
7. 加入适当体积的FBS(消化酶体积的10%)中止胰蛋白酶作用;
8. 用培养基洗;
9. 用培养基重悬分离得到的细胞,按大约1×103个细胞/cm2密度将细胞接种到培养瓶中;


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