流感疫苗的生产：

I. 什么是流感疫苗：流感疫苗是无菌的灭活病毒悬液，由 A（甲）型或 B（乙）型流感病毒的一株或多株或二型混合液组成，病毒在鸡胚中分别单独培养。流感疫苗分为三种：

用适当方法灭活的全病毒悬液；

用物理化学方法部分或完全裂介处理病毒颗粒的无菌悬液（裂介疫苗）

经处理后主要由血凝素和神经氨基酸抗原制成的无菌悬液（亚单位疫苗）

目前还可以通用具有表面抗原的高密度繁殖培养的重组病毒株生产的流感疫苗。

II.  血凝素参考品：当流感在某地区或世界可能将或已经开始流行时，WHO将流行的新病毒株列入疫苗生产范围并立即发放每 ml中含有标定的μg数的流行流感病毒的血凝素，由国家有关部门分发给各个流感疫苗的生产厂和检定研究所实验室，用免疫扩散法测定产品的血凝素抗原，并和标定抗原进行比较和鉴定。

III.  疫苗生产 严格按照 WHO及国家有关部门规定进行生产厂的检察及内部装修设计，特别注意区域隔离、灭菌消毒、设备有效性、生产人员的安全保证等等。

严格控制生产原材料：只有经过国家监控部门批准的毒株方可用于生产。灭活流感疫苗用的病毒株必须有经鉴证的记录（原始株及后续处理资料；用于高产表达表面抗原的重组株病毒在培养过程中可能发生抗原变异，因此必须用血凝素单克隆抗体试验或动物免疫血清血凝抑制试验证明无此抗原变异。

种子批：疫苗生产只能用工作种子批，工作种子批只能传一代，种子批病毒必须确认不含外源性活微生物（如用鸡胚制备的种子批必须确认无鸡白血病病毒和腺病毒）。液态种子批储存在－60℃以下，冻干品保存在－20℃以下。

病毒繁殖：用于生产流感灭活疫苗的流感病毒用鸡胚培养，鸡蛋应来自健康鸡群并经国家有关部门批准。用工作种子批病毒对每个鸡胚尿囊腔注射 0.2ml， 33℃～37℃培养 3天。培养后只能收获鸡胚尿囊液和羊水，不允许在任何过程中使用含有β－丙酰胺的抗生素（允许使用其他微量适宜的抗生素）如果疫苗用裂介病毒制成，裂介条件、使用的化学试剂品种及浓度必须经国家批准。

灭活：单价病毒合并液在制成后应尽快灭活，灭活前保存于 5℃±3℃不超过 5天。在灭活前应检查有无细菌或霉菌污染。灭活方法经国家批准且必须能杀灭鸡白血病病毒和支原体。【如使用福尔马林（40％甲醛）或β－丙烯内脂，浓度不能超过 0.1％】。灭菌后病毒合并液储存于 5℃±3℃。

浓缩和纯化：一般用超速离心法（超速区带离心或超速连续流离心）可以在灭菌前或灭菌后进行。浓缩或纯化过程中应最大程度地保护血凝素和神经氨酸酶抗原。

产品鉴定：要进行表面抗原浓度测定、抗原鉴别试验、灭菌试验、总蛋白量测定（蛋白含量不得超过血凝素含量 6倍，但在任何情况下，一个人份剂量的一个毒种蛋白量不超过 100μg，一个人份总蛋白量不超过 300μg）、卵白蛋白测定（一个人份剂量卵白蛋白含量不得超过 5μg，可以低于 1μg）、血凝素测定（一个人份剂量中血凝素含量为 7～20μg，按标签上的血凝素含量，实际含量应在 80％至 120％之间；还要用鲎试剂做内毒素测定。

附件：

一些有关的术语：

母种子批：（Master seed lot）:从 WHO推荐的一株病毒在同一时间内培养得到的一定数量的同一成分的病毒。母种子批用于制备工作种子批。毒种母种子批及其传代代数均由国家有关部门批准。

工作种子批:（Working seed lot）:由毒种母种子批培养所得到的一定数量的病毒为同一成分病毒，经过全面鉴定。病毒传代代数不得超过国家检定当局批准的最长代数，工作种子批用于疫苗生产。

单一收获物：（Single harvest）:用同一毒株同时接种并同时收获的一定数量的病毒液。

单价病毒合并液：用同一病毒株在同一时间生产的一定数量的单一收获液的合并液。

半成品：（Final bulk）:将一批或数批单价病毒合并液置于一容器中并由此分装到疫苗瓶中。半成品可以含有一个或数个病毒株。

成品批：一批已分装并封口的疫苗瓶，在分装过程中受污染的危险性是相等的。因此，成品批必须是由一批半成品在同一工作程序中分装的疫苗。