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SRSV (Small round structured Virus) 小圆结构病毒的离心分离

2020.7.14
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

SRSV会导致食物中毒,症状:腹泻,呕吐,发烧等

设备:1. 通用台式或立式高速冷冻离心机(有15ml 角转头及1.5ml 微量转头)
    2. 超速离心机:Hitachi CS150GXL微量超速离心机S52ST甩平转头,4×5mlPA管,或落地式超速离心机CP70MX,日立P40ST转头,6×13ml薄壁PA管或P65ST转头,4×5ml薄壁PA管,
分离步骤:
1.病毒性肠炎病人粪便或感染病毒的动物、水产品的组织1g-2g,加10ml 纯水放入15ml PP管
2.4000xg,4℃离心30分
3.去沉淀,上清液加入HCFC141b搅拌2分钟
4.2000xg,4℃离心30分
5.去沉淀,上清液用于超速离心。
6.1.2ml,30%(w/w) 蔗糖液置于5ml 管下部,上部用(5)上清液加至距管口3mm(约3.6ml)或其他容量离心管按比例配置梯度液和样品
7.超速离心纯化:35,000rpm-38,000rpm (RCFmax约12,470xg-147,000xg),4℃,4-3小时,加速“5”,减速“7”
8.超速离心后移去上清液及30%蔗糖液,小心地吸去沉淀上部残液(注意不要触及沉淀!)
9.沉淀加36ul 纯水用石蜡封口,直立4℃冰箱中保存过夜。
10.次日,取出,振荡30分钟,移入1.5ml eppendorf 管
11.高速离心机15000rpm ,4℃,30分
12.病毒在上清液中。可取1—2ul 上清液负染后上透射电镜观察(100KV,×40000)SRSV为小球形,直径约20—30nm。


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