PCR Array 简单实用的检测基因表达的高通量方法（五）

重复性 实时定量PCR的定量特性使得PCR芯片的重复性强。为检测重复性，2位研究者采用了同样的总RNA样品，分别进行了4次重复试验。两个人使用同种PCR芯片，但批号不同，并且每个人都分两天进行试验。比较两位研究者分别做的4张芯片的原始Ct值。图5显示了比较结果的图示和相关系数。每一组比较结果均获得理想的曲线，斜率为1.0，相关系数均不小于0.99。结果显示，PCR芯片实验体系的重复性高，不同批次的芯片，不同时间进行实验，不同的重复设计，在原始值水平都能获得很高的重复性。    图5 PCR芯片的重复性  PCR芯片具有高重复性    RNA样品为XpressRef^TM人总RNA（GA-004，5.0ug），PCR芯片为人药物代谢PCR 芯片（APH-022A），采用RT² Real-Time^TM SYBR Green / 荧光素PCR反应体系（PA-011）。两位不同的研究者分别进行了4次重复。A图比较了原始的Ct值。B的表格则说明A中每组比较获得的曲线的相关系数。 由于PCR芯片在技术上具备很高的重复性，在确保RNA样品制备良好，PCR芯片实验操作正确的情况下，所观察到的基因表达水平的差异都是所研究的样本本身的生物学特征所引起的，而不是由于实验技术所造成的差异。表3总结了RT²Profiler^TM PCR芯片的特点。  

表3  RT²Profiler^TM PCR芯片的特点   总结： RT²Profiler PCR芯片是研究一组特异性基因表达水平的理想方法。基于SYBR green   的实时定量PCR方法，适用面广，简单方便，使PCR芯片具有广泛的应用前景。选择合适的芯片模式和相应的反应体系，即可开展PCR芯片实验。芯片包括预设计的通路特异性PCR芯片或者客户订制PCR芯片。PCR芯片具有与实时定量PCR相当的灵敏度，特异性和重复性。PCR芯片的设计思路，使实验设计和实际完成实验的时间大大缩短，对结果的分析也更直接有效。使用PCR芯片，每张芯片使用的总RNA样品量最少可低至0.5ng，最多则可达到5.0ug。PCR芯片的特异性保证扩增产物的唯一性和基因特异性。因此，检测得到的基因表达水平差异真实的反映了所要研究的基因的情况。PCR芯片的重复性（intra-lab的相关系数为0.99）保证实验结果是可重复的。RT²Profiler PCR芯片结合了实时定量PCR的优点和芯片的高通量，是研究者开展研究的得力工具。