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荧光定量PCR:基因相对表达量计算方法

2021.5.22
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coconut

天道酬勤

  荧光定量PCR之后计算目的基因的相对表达量一般采用2-△△ct的方法。我们还是假设对照组和处理组各有三个生物学重复(即对照组3个cDNA样品cDNA1, cDNA2, cDNA3,处理组3个cDNA样品cDNA4, cDNA5, cDNA6),三个技术重复(即每个cDNA的每个基因点三个孔)。

  1. 跑完程序后,先看一下溶解曲线。如果熔解曲线的峰比较单一,而且同一个基因的峰基本重合,说明没问题;如果峰比较杂乱,多峰,甚至压根没峰,证明结果不行,要么引物有问题,要么加样有问题,或者程序搞错了,总之自己要回想一下哪里出了问题。

  2. 将原始ct值按照如下格式输入excel中。

  3. 分别计算三个技术重复的ct值的平均值(注意,计算之前,先看一下三个ct值之间的差值,一般相互之间的差值不超过0.5)。


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