2．1．2
流式细胞仪分选原理并不是所有的流式细胞仪都具有分选功能。流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的。由喷嘴射出的液流柱在电信号作用下发生振动，断裂形成均匀的小液滴。根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中。使用不同孔径的喷孔及改变液流速度，可能会改变分选效果。从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间。精确测定延迟时间是决定分选质量的关键，可根据具体要求进行适当调整。
2．1．3
数据的显示和分析数据处理主要包括数据的显示和分析。单参数直方图是使用最多的图形显示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析。单参数直方图是由x、Y二方向组成的二维平面图。横座标x是所测的荧光或散射光的强度，用“道数”(Channel
No．)来表示。选择的放大器类型不同，标度不同。纵座标Y通常表示被测细胞的绝对数目。正常情况下，数据分析得到的图形为具有一个或若干个峰的曲线图。对曲线图的解释应该具体问题具体分析。
除直方图外，数据显示方式还包括二维点图、二维等高图、假三维图和列表模式等。二维点图也是比较常用的数据显示类型。它显示两个独立参数与细胞相对数之间的关系，也是二维平面图，横纵坐标可以根据自己选定的被测参数自行决定，点的位置表明了细胞和颗粒具有的二个被测参数的数值。二维点图所提供的信息量要大于单参数直方图。
数据分析的方法大体可分为参数法和非参数法两大类。当被检测的生物学系统能够用某种数学模型时则多使用参数方法。非参数分析法不用对显示的图像做任何假设，也不采用数学模型，分析程序可以很简单．也可能很复杂。临床医学较常使用非参数分析法。
2．2
流式细胞仪性能的技术指标流式细胞仪性能的技术指标主要有荧光分辨率、荧光灵敏度、适用样品浓度、分选纯度等。荧光分辨率是指分辨两个相邻峰的最小距离，通常用变异系数(CV值)来表示。现在市场上主流型号出厂时的荧光分辨率应该小于2.0％。荧光灵敏度反映了仪器探测最小荧光光强的能力。一般用荧光微球上可测出的FITC的最少分子数来表示。目前仪器均可达到1000左右。仪器工作时样品浓度一般在105—107细胞／m1。分析速度／分选速度是指流式细胞仪每秒种可分析或分选的颗粒数目。一般分析速度为5000—10000，分选速度控制在1000以下。
流式细胞仪测量的数据是相对值，因此需要在使用前对系统进行校准或标定。流式细胞仪的校准有二个目的，即仪器的准直调整和定量标度。通常使用标准微球作为非生物学标准样品，鸡血红细胞做为生物学标准样品。
3 主流流式细胞仪型号及其特性介绍
目前拥有市场较大份额的公司是美国的BD(Becton— Dickinson)公司、Beckman—Coulter公司(原名称Cou1．ter)和德国的Partec公司。
3．1 BD公司流式细胞仪介绍BD公司生产的流式细胞仪都冠以FACs(fluorescence activated cell
sorter)，即荧光激活细胞分选器。其型号种类比较齐全，如早期的FAC．Sort、FACS
Canto、FACSean，。现在市场上供应的型号有五种：FACSCount(小型流式细胞仪)、FACSCAlibur(流式细胞仪)、FACSAfia(流式细胞分选仪)、FACSVantage
SE(多色分析和高速分选流式细胞仪)、LSRII(数字化分析型流式细胞仪)。
FACSCount为精确计数淋巴细胞CD3，CD4，CD8绝对数而设计的。FACSCalibur是全自动多色流式系统，偏重于临床，其整体设计帮助临床医生快速实现常规免疫表型、CD4T细胞计数、DNA、网织红细胞、血小板等临床分析，兼具分选功能。配备有二根激光管，可同时检测4个荧光参数。可识别粘联细胞。
BD
FACSAfia流式细胞分选仪为台式高速细胞分选仪，获取速度达70，000细胞/s，分析速度达50，000细s。使用石英杯流动检测池固定光路校准技术。使用三种激光，多色分析，分析参数可达15色。两管或四管分选，可以使用多种规格的收集管。液流监测系统白动监测液流断点，检查堵塞，实现了细胞分选的无人操作。配件BDACDU装置，可以在微孔板或载波片上定量分选细胞。FACSVantage
SETM是在FACSVantage的细胞分选功能基础上推出的分选增强型流式细胞仪。六色荧光分析系统，点对点分选，配置FACS
Diva数字化系统，提供全面的配套试剂。速度和功能优于FACSVantage。
BD LSR II是LSR的数字化升级版，其性能介于FACSVantage SE和FACS Calibur之间，是专为生命科学研
究设计的台式机。配备固定校准的紫外激光，四种激光立体空间激发、十色荧光同时分析、电子系统数字化、比较易学易用。
3．2 Beckman—Coulter公司流式细胞仪介绍 Beckman—
Coulter公司生产的流式细胞仪以Profile(早期，现已停产)和EPICS系列为代表，近年又推出了Cytomics
FC500系列。EPICS系列是大型流式细胞仪，目前市场上有XL、XL—MCL和ALTRA三种型号，其中ALTRA具有分选功能，适用于免疫学、细胞生理、分子生物学、遗传学、微生物学、水质分析和植物细胞分析。Cytomics
FC500系列流式细胞仪体积小，可自动进行5种颜色的分析，适用于免疫学检测，如人类HIV诊断。特别是FC50OMPL的独特设计可以在同一系统上使用12×75mm的离心管和24或96孑L的平板。特别适合工作量大的实验室。这二个公司主要针对医学研究和临床工作进行设计和生产，其产品可应用于生物医学基础研究以及临床检测的许多领域，如遗传、肿瘤、血液、免疫等诸多研究中红细胞、T细胞、淋巴细胞亚群测定、检测早期细胞凋亡、肿瘤细胞免疫测定等。这二个公司的流式细胞仪价格昂贵，我国主要购买、使用的单位基本上都是一些医疗机构。
3．3 Partee公司流式细胞仪介绍
与BD和Becman—Coutler公司的产品相比，德国Partee公司生产的流式细胞仪的共同特点是体积小，造价低，易操作，便于携带，适合植物学研究，适合边远地区和发展中国家。德国Partec公司的产品分为三类：CCA家族、PAS家族和CyFlow家族(Galaxy为早期产品，已停产)。CCA家族包括细胞计数分析仪CCA和倍性分析仪PA—I。它是单或双参数的台式小型机，可以进行一些常规分析，如核DNA测定(检测倍性或细胞周期)、细胞计数、细胞凋亡。它的特点是体积小，易操作，价格低，检测范围广，可以检测多种荧光素(如PI、DAPI、Fluorescein)发出的荧光。PAS家族包括粒子分析系统PAS、粒子分析系统III(PAS—III)和倍性分析仪PA—II。提供三种激光器的三种组合，可检测十余种荧光染料。最多可检测和记录八个独立荧光参数。
倍性分析仪PA能够在2分钟内自动测量植物的倍性水平，检测异倍体。可以对叶片、幼苗、种子、果皮、根、花等植物材料进行分析。在大多数植物中，异倍体染色体的检测分辨率为±1条染色体。PA—I使用HBO一100汞灯，属于弧光灯，可产生紫外激发光和蓝光。PA—II中增加了488
am氩离子激光器，能够检测几乎所有的荧光染料，如DAPI，Hoeehst，PI，EB，MMC，FITC，FDA等。汞灯发光是电流经过气体时，气体电离产生的。它能提供最佳的激发波长。
CyFlow(R)SL配备三种激光管，可应用于诸如人类健康、微生物学、工业应用、过程控制、生态学等研究。如HIV扫描中免疫标记细胞计数、食品处理过程中的微生物计数、细胞凋亡等。它使用l2 V直流电，特别适合边远地区和发展中国家。
国际上20世纪80年代开始将流式细胞仪检测应用到植物的研究中(Galbraith
，1983)，众多学者都认为流式细胞仪是一种准确、快速的检测DNA含量的方法(Michae|son
，1991)。应用范围主要是利用流式细胞仪研究属内、属间多种植物的DNA含量(Baird ]，1994；Ja—cob[，1996；HALL
，2000)和倍性水平(Costich ，1993；Meng[101，2002)、检测体细胞杂种(Pfosser⋯
，1995；Kel—ler[”，1996)和游离小孢子培养再生株(Kim¨3
，2003)的DNA含量。过去我国应用这一检测技术的植物研究工作者寥寥无几，且大多是在国外实验室完成的。研究内容包括植物生理Ⅲ 引、程序性死亡Ⅲ
、倍性鉴定mI2
等。植物研究中使用的流式细胞仪基本上都是Partec公司的产品，也有少量是BD公司生产的流式细胞仪。BD公司的产品主要定位于医学研究与应用，与Partec产品相比，不太适合从事植物染色体倍性的鉴定。主要体现在不能提供植物样品制备技术／试剂，数据获取软件可同时检测到的倍性数目少。
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