一、原理
凯氏法测定试样含氮量，即在催化剂存在下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵，加入强碱（NAOH）并蒸馏使氨溢出，用硼酸吸收后，用标准盐酸溶液滴定测出含氮量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
二、试剂
（1）、硫酸铜
（2）、硫酸钾
（3）、硫酸（密度为1.8419G/L）
（4）、硼酸溶液（20G/L）
（5）、氢氧化钠溶液（400G/L）
（6）、盐酸标准滴定溶液（c(HL)=0.1mol/l）
、混合指示剂：1份甲基红乙醇溶液（1G/L）与5份溴甲酚绿乙醇溶液（1G/L）临时混合。也可用2份甲基红乙醇溶液（1G/L）与1份亚甲基蓝乙醇溶液（1G/L）临时混合。
三、仪器
定氮蒸馏装置
四、实验过程
第一步：样本的消煮
试样处理：称取0.20-2.00G固体试样或2.00-5.00G半固体试样或吸取10.00ml-25.00ml液体试样（约相当氮30mg-40mg）,移入干燥的100ml或者500ml定氮瓶中，加入0.4g硫酸铜，6g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h-1h.取下放冷，小心加入40ml水。放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。
第二步：氨的蒸馏
(1):按图1装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至三分之二处，加数粒玻璃珠，加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
(2):准确吸取10ml试样处理液由小漏斗流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，棒状波塞塞紧。将10ml氢氧化钠溶液（400g/l）倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧。并加水于小玻杯以防漏气。
(3):向接收瓶内加入10ml硼酸溶液(20g/l）及1滴-2滴混合指示液，并使冷凝管的下端插入液面下。
(4):夹紧螺旋夹，开始蒸馏5min,移动接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸馏1min，然后用少量的水冲洗冷凝管下端外部，取下冷凝管。
第三步：滴定
以盐酸标准滴定溶液（0.1g/l）滴定微红色为终点。同时准确吸取10ml试剂空白消化液按以上操作。
五、结果计算：
试样中蛋白质的计算公式：
X=（v1-v2）*c*0.0140 *F*100
M*10/100
六、操作中的注意事项。
消煮部分：
1、一般要求样品重量在1.0g左右，根据蛋白质含量的高低来决定样品的质量。蛋白质饲料在0.5g左右，对于能量饲料样重应控制在1.0g-1.5g，样重决定了总氮量的高低和标准酸的用量。
2、减少样品在硫酸中浸泡的时间，防止由于浸泡时间太长，大量样品被硫酸炭化，炭粒浮在硫酸上面，加热反应产生的气体，不能及时排出，就会把炭化后的样品顶出烧瓶，出现溢瓶现象，加酸直接放在电炉上，样品一边炭化一边反应。
3、消化时间因蛋白质含量高低、称取试样的质量、样品消化的难易程度而异，一般15min-2h不等，具体时间可根据化验者工作经验自行定夺。
4、开始消化用小火，待样品焦化，泡沫消失后，逐步缓慢加强火力，消化过程中经常转动烧瓶，将溅到烧瓶壁的黑渣全部投入瓶底的硫酸里，以避免消化不完全。
5、样品停止加热后，如冷却时间过长易引起硫酸样液凝结不易溶解，故因冷却至不烫手时加入少量蒸馏水（20ml）,转移到容量瓶中，冷却，定容，注意水与硫酸的剧烈反应，以免凯氏烧瓶破裂；
6、在一般情况下硫酸的用量是10ml，具体情况具体分析，根据试样的种类和质量、蛋白质的含量，消化的难易程度，样品中含水量、样品中成分的不同而加入不同质量的硫酸。对于含水量较高及动物样、淀粉含量高的精料，或者体积大、重量轻的粗饲料，应加15ml-20ml的浓硫酸，
7、加浓硫酸时，一定要注意安全，防止洒到人身上和桌面上，如果把硫酸滴到手上，立刻用大量的自来水清洗，再用饱和碳酸氢钠处理。
8、消化好的样品转移到容量瓶的过程，不能摸烧瓶底部，硫酸稀释释放大量的热，整个转移过程都要接触烧瓶上部，为防止硫酸侧漏，应在容量瓶上加漏斗，加水少量多次，操作快、稳、准。转移完后不能立刻定容，应冷却至室温后再定容，若未冷却定容，冷却后体积缩小，从而使吸取的量偏大，结果偏高，若隔夜定容，当天加入蒸馏水，再用塑料布包好，防止空气吸收氨气，消化液结晶不易消化，可在电炉上加热，待结晶消化再转移。
蒸馏部分：
1、蒸汽发生器内的水在2/3处，太多会溢出烫伤，太少压力不足，保持水一直呈酸性。
2、试样的分解液移取要准确，移取分解液之前，先把容量瓶摇匀，移液管要润洗2-3次，移液管自然流入，切记移液管放到小烧杯内壁和洗耳球吹移液管。
3、检查蒸馏装置的密封性，不能漏气，用0.02mol/l的硫酸铵标准溶液蒸馏检查。
4、锥形瓶往往用洗衣粉洗涤，再用自来水，蒸馏水冲洗，洗衣粉不易彻底冲洗干净，导致锥形瓶内壁环境偏于碱性；锥形瓶预处理再使用，冲洗干净的锥形瓶加入20ml蒸馏水，2滴混合指示剂，再用0.02mol/l-1mol/l的盐酸或氢氧化钠溶液滴定至刚好由蓝色变为灰红色，然后倒掉该溶液，再加硼酸吸收液25ml-35ml和混合指示剂2-3滴，若加入指示剂后硼酸变颜色，则说明硼酸中混入碱性物质或蒸馏水偏碱性，需重新配置硼酸溶液。
5、蒸汽的气流一定要均匀，切记热力不稳，中途中断或蒸汽不足，温度不足产生倒吸，气流过快会硼酸吸收不足，蒸馏慢，氨没有被完全蒸馏出来，实践证明；蒸馏速度一般应控制在每分钟蒸馏出液体在5ml-7ml之间。
6、蒸馏时间多为5分钟，加入样液分解液和氢氧化钠后蒸馏4min,使冷凝管末端离开硼酸再蒸馏1min,实验证明，蒸馏完再多蒸馏1min多实验没影响，所以可以从硼酸刚刚开始出现绿色时开始计时，最终在4min后，可以用ph试纸进行检测，硼酸的吸收温度不超过40度，否则吸收效果偏低。
7、反应室的彻底清理，以免影响下次的实验，反应室的降温，如果反应室的温度过高，再加之氢氧化钠与硫酸反应放热，易产生爆沸。
8、检查冷凝水是否打开，防止蒸馏瓶的气压过高，造成瓶爆裂和人员烫伤，不完全堵塞气路，绝对保证分气球有一个路是通的。
9、加氢氧化钠前冷凝管要插入接收瓶内，保证氨气完全被吸收。
10、样液加入反应室，加水再加硫酸，这个过程不能错，碱液要缓缓加入，不可过快。
滴定部分：
1、滴定用的盐酸溶液必须准确，使用前应将溶剂上下摇动几次，保证溶液浓度一致，滴定时注意排空底部气泡。
2、滴定过程要先快后慢，接近终点时，要一滴一滴的进行，防止酸过量导致蒸馏失败。
锥形瓶如果用洗衣粉洗了，要用自来水清洗，再用蒸馏水清洗，保证锥形瓶用前呈中性。
初识化验：
夕岚分彩翠，高树藏莺声。
一望可相见，一步如重城。
一误误全局，一差差分明。
所测隔山海，山海不可平。
熟悉化验：
众里寻他千百度。蓦然回首，那人却在，灯火阑珊处。
正确的认识误差，使实验更精确：
1、系统误差——可测误差
特性：重复出现、恒定不变（一定条件下）、单向性、大小可测出并校正，故有称为可定误差。可以用对照试验、空白试验、校正仪器等办法加以校正。
a.方法误差：是分析方法本身所造成的；
b.仪器误差：主要是仪器本身不够准确或未经校准引起的；
c.试剂误差：由于试剂不纯和蒸馏水中含有微量杂质所引起；
d.操作误差：主要指在正常操作情况下，由于分析工作者掌握操作规程与控制条件不当所引起的。如滴定管读数总是偏高或偏低。
2、随机误差——不可测误差
它是由于某些偶然的因素所引起的。
如：测定时环境的温度、湿度和气压的微小波动，以其性能的微小变化等。
特性：有时正、有时负，有时大、有时小，难控制（方向大小不固定，似无规律）
但在消除系统误差后，在同样条件下进行多次测定，则可发现其分布也是服从一定规律（统计学正态分布），可用统计学方法来处理。
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