一、 实验试剂:
l. 0.1mol/L碳酸盐缓冲液(PH10.0)
溶解无水碳酸钠6.39g碳酸氢钠3.36,4-氨基安替比林结合1.5g于800ml蒸馏水中,将此溶液入1000ml容量瓶内,加蒸馏水至刻度,置棕色瓶中保存。
2. 20mmol/L 磷酸苯二钠溶液:先将500ml蒸馏水煮沸,消灭微生物,逐渐加入磷酸苯二钠2.18g(如含2分子结晶水则应称取2.54g)冷却后加氯仿2ml防腐,置冰箱保存,称底物溶液.
3. 铁氰化钾溶液:分别称铁氰化钾2.5g,硼酸17g各自溶于400 ml蒸馏水中待两液混合后,加蒸馏水至1000ml,置棕色瓶中避光保存,如出现蓝绿色即弃去。
4. 酚标准贮存液(1mg/ml)简易购买商品标准液
5. 酚标准应用液0.05mg/ml:酚标准贮存液5m1,加蒸馏水至100ml,此夜只能保存2-3天。
二、 实验操作:取16mm×100mm试管按表进行编号与测定
血清碱性磷酸酶测定步骤:
立即混匀,在波长51Onm,以蒸馏水调零点,读取各管吸光度.测定管吸光度,减去对照管吸光度,查标准曲线表,求出酶的活力单位。
金氏单位定义:100ml,血清在37℃,与底物作用5分钟,产生1mg酚为一个金氏单位
标准曲线绘制: 立即混匀,在波长510nm,以零号管调零,读取各管吸光度,并和相应酶活力单位绘制标准曲线。
参考值:成年人:3 - 13 金氏单位
儿童: 5 - 28 金氏单位
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