实验步骤
一.材料
1.扩增和制备克隆
(1)甘 油 保 存 的E.coli, 质 粒 含 有 目 标 cDNA 插入片段。
(2)Tag 聚合酶和缓冲液(New Englang Biolabs cat. no. M0267)。
(3)10 mmol/L dNTP 混合物。
(4)用来扩增载体中插入片段的引物稀释到 10 μmol/L (M13、 SP6、 T4 或 T7 为常用引物)。
(5)不含核酸酶的水配制的 7 0 % 乙醇。
(6)Tris-EDTA 缓冲液: 10 mmol/L T ris, lmmol/L E D TA , pH 8.0。
(7)普通 96 孔圆底培养板。
(8)96 孔板培养用封贴(breathe easy strips, USA Scientific cat. no. 9123-6100)。
(9)L B 培养基:每 升 l0g 胰蛋白胨, 5 g 酵母提取物, 10g NaCl, pH 7.0。