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纯蛋白质的紫外光谱 A280nm/A260nm实验

2020.8.11
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

操作程序

1) 以合适的缓冲液为空白对照,小心测定蛋白质溶液自 210nm 至 340nm 的紫外光谱。

2) 如 310mn 至 340nm 未见吸收(蛋白质在这一区域没有吸收),可简单地测定 280nm 和 260nm 处的吸收值,A280nm/A260nm 比应为 1.8~2.0。

3) 如 310nm 至 340nm 可见明显吸收,则是光散射所致(是由于蛋白质大或是聚集作用的结果),必须用 Leach 和 Sheraga(1960) 法校正 A280nm 和 A260nm值。此法是以吸收值的对数对波长的对数作图,从 310mn 至 340rnn 的吸收值外推, 确定 280nm 和 260nm 处因光散射而造成的吸收值。经校正的 280nm 和 260nm 处的吸收值可用来确定 A280nm/A260nm 比, 并从 E(1 mg/ml) 得出蛋白质的浓度(见 P.168)。


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