大鼠主动脉平滑肌细胞培养

实验方法原理 运用组织块贴壁法进行SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养，并用倒置相差显微镜观察、HE染色后形态学观察以及用免疫组化对培养细胞进行鉴定。

实验材料 SD大鼠

试剂、试剂盒 PBSFBSDMEM

仪器、耗材 手术剪手术钳眼科剪刀眼科镊子大头针手术刀培养皿

实验步骤

一、实验步骤

1. SD 大鼠(150-200 g)，断头，浸入75%的酒精中15 min。

2. 置入超净台中，将大鼠固定于杀鼠板上，在无菌条件下打开腹腔，分离出胸主动脉、腹主动脉， 摘出。

3. PBS 清洗3 遍，剥去外膜，用手术刀片刮去内膜，留下中膜并将其移入1 mL 的培基中、剪成1×1 mm2 大小组织块。

4. 再将PBS清洗组织块，移入25 mL 的培养瓶中，用尖嘴弯管均匀贴好组织块，放入37℃、5% CO2的培养箱倒置培养6 小时后，待组织块贴壁后，再加入2.5 mL 培养液后放回培养箱中。

5. 随后每3 天予以全量换液。

二、结果

3-5 天后可见组织块周围有细胞爬出，大约2 周后80－90%融合。

注意事项

1.  第四步中最后加入2 mL 培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下，勿使组织块吹下。