试剂、试剂盒 琼脂胰化蛋白胨NaClNaOH四环素
仪器、耗材 玻璃瓶烧瓶
实验步骤
一、极限培养基平板
800 ml水加入15 g琼脂，高压灭菌15 min。然后加人200 ml无菌的5 X 极限培养液和碳源。待冷却至50°C，加人补充成分。每个10 cm平板倒入32~40 ml 培养基（每升培养基可制作25〜30个平板）。于室温干燥2〜3天，或将平板的上盖稍 微打开，于37°C或在层流通风橱干燥30 min，将晾干的平板包裹好储存于4°C。
二、丰富培养基平板
将水加人以下所列出的培养基配方的成分中，定容至1L，高压灭菌25 mm。待冷却至50°C，加人补充成分。每个LB或H培养基平板倒人32~40 ml培养基（每升培养基可制作25〜30个平板），每个λ肉汤培养基平板倒人约45 ml培养基（每升培养基可制作20个平板）。平板的干燥和保存如上所述。
1. H 平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
15 g 琼脂
2. λ肉汤平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
2.5 g NaCl
10 g 琼脂
3. LB平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
1 ml 1 mol/L NaOH
15 g 琼脂或者琼脂糖
三、添加物
其他的抗生素和半乳糖苷
1. 抗生素（如果需要）：
氨苄青霉素 50 μg/ml
四环素12 μg/ml
2. 半乳糖苷（如果需要）：
X-gal终浓度为 20 μg/ml
IPTG终浓度为0. I mmol/L
四、顶层琼脂培养基
顶层琼脂培养基常用于将噬菌体或细胞在平板的表面均匀分布成一薄层。以1 L的 批量配制顶层培养基，高压灭菌15 min使之熔化，冷却至50°C，轻轻旋转晃动使其混 合均匀，分装至100 ml瓶中。再次高压灭菌，冷却，拧紧盖子，于室温保存。使用前， 用水浴或者微波炉熔化顶层琼脂，冷却至45〜50°C并维持在该温度。顶层琼脂中琼脂 的含量比普通平板的少，在该温度下，顶层琼脂可保持熔化状态数天。
1. LB 顶层培养基，每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
7 g 琼脂
2. γ顶层球脂培基，每升
10 g 胰化蛋白胨
2.5 g NaCl
7 g 琼脂
3. 顶层琼脂糖培养基，每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
6 g 琼脂糖
五、穿刺琼脂培养基
穿刺琼脂培养基用来保存菌株。加人胸腺嘧啶则可使thy-细菌生长。据认为，半胱氨酸可很大程度地延长细菌在穿刺培养物中的存活时间。
1. 穿刺培养基，每升
10 g 营养肉汤
5 g NaCl
6 g 琼脂
10 mg 半胱氨酸盐-Cl
10 mg 胸腺嘧啶
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