[实验原理]
在一个PCR 体系中同时扩增多个基因座的方法叫做复合扩增（Multiplexing
PCR）。STR的复合扩增增加了单次检测的信息量，提高了个人识别率，同时可降低成本和检材的消耗，因此显示出重要的法医学应用价值。其基本原理就是利用基因座内等位基因长度的不同；扩增的基因座之间片段长度范围的不同，采用高分辨率的毛细管电泳技术进行分离。同时，结合激光诱导荧光染料显带自动分析技术。
通常，对于每个基因座中一条引物进行荧光标记，不同的基因座引物标记不同的荧光，结合扩增片段的迁移率和荧光的颜色，应用基因序列分析仪及采用相应的分析软件可自动化检出复合扩增的众多STR 基因座的所有信息。
[试剂与仪器]
试剂：1. Identifiler 试剂盒进行PCR 扩增的Master Mix:
⑴ Identifiler PCR Reaction Mix; ⑵ Golden Taq 聚合酶; ⑶ Identifiler Primer Set。
2. 分析试剂：
⑴ Hi-Di 甲酰胺；⑵ GS-500LIZ 分子量标记；⑶ 等位基因Ladder。
仪器：1. PCR 扩增仪（GeneAmp PCR System 9700）；
2. DNA 序列分析仪（ABI 公司3130 基因分析仪）。
[操作方法]
1. PCR 扩增：
⑴ Master Mix 的准备：根据扩增样品数目按下列比例配制。
Master Mix 试剂用量（μl）
Identifiler PCR Reaction Mix 样品数×10.5
Golden Taq (5U/μl) 样品数×0.5
Identifiler Primer Set 样品数×5.5
⑵ PCR Mix 的准备：
PCR Mix 试剂用量（μl）
Master Mix 15
DNA (0.05-0.125ng/μl) 10
总体积 25
⑶ PCR 反应条件：
95℃11min→（94℃ 1min→59℃ 1min→72℃ 1min）×28 循环→60℃ 60min→4-25℃ 保温
2. 扩增产物电泳分析样品的制备：
试剂 3130 分析仪用量（μl）
Hi-Di 甲酰胺 8.7
GS-500LIZ 分子量标记 0.3
PCR 产物或Ladder 1
总体积 10
95℃变性3min→迅速冰冷3min。然后将样品放入3130 样品载样盘上，备检。
3. 3130 电泳操作：见如下所列电泳参数。
4. Data Collection v2.0 软件操作：
①新建Instrument Protocol：在Data Collection v2.0 软件的树形浏览窗依次点击GA Instruments
> ga3100 / ga3100-Avant > Protocol Manager；在Instrument Protocol
窗口点New 打开Protocol Editor 对话框；完成编辑：
输入一个名字；在Type 下拉菜单选择REGULAR；在Run Module 下拉菜单选择HIDFragmentAnalysis36_POP4_1；在Dye Set下拉菜单选择G5。OK。
②新建Results Group：在Data Collection v2.0 软件的树形浏览窗依次点击GA Instruments>
Results Group；点New 打开Results Group Editor 对话框；在General tab
输入名字；在Analysis tab 设置自动分析；在Destination tab 设置数据保存路径；在Naming tab
设置数据文件和文件夹名称；在Automated Processing tab 设置数据自动处理方式。OK。
③新建GeneMapper ID Software Plate Record 用于自动分析：在Data Collection v2.0
软件的树形浏览窗依次点击GA Instruments > ga3100 / ga3100-Avant > Plate
Manager；完成New Plate 对话设置：名称，在Application
下拉菜单选择GeneMapper-Generic(手工分析)或者GeneMapper-<Instrument
name>(自动分析)，输入板型、操作者名称等，OK，打开编辑窗口，完成样品表(Plate Record)。将样品板组装好，放到3100
上；找到Plate Record并选中它，然后点击对应样品板的plate position indicator，点击RUN 按钮开始电泳。
[结果判断]
全自动DNA测序工作站会自动地完成对样品片段信息的分析，应用GeneMapper ID v3.2软件进行数据分析后的结果以样品文件的形式保存于计算机的硬盘中。分析好的样品文件可以用序列分析软件来打开查看结果。
1. 首次使用需要输入Panels和Bins。新建分析方法，其中HID_Advanced 适用于PC系统数据。
2. 在File下拉菜单中选Add samples，然后根据样品文件所在路径找到并导入样品文件，每个文件夹中必须包括Ladder。
3. 选择设置如下参数：Table setting, sample type, analysis method, panel, size standard, matrix。
4. 点击Run 按钮，输入project 名称，点击OK 开始分析。
5. 查看数据图谱，生成报表。
电泳信号图的X轴表示时间，Y轴表示相对荧光强度，图上不同颜色的信号线代表了样品制备时所使用的不同荧光素，图中的每个峰代表一个DNA片段。
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