一、 L型细菌增菌培养基
(一)高渗液体L型细菌菌增菌培养基
[用途]
可用作基础培养。也用于血液、骨髓、胸水等标本进行L型细菌增菌培养。
1.高渗盐液体增菌培氧基
[配法]
新鲜牛肉500g，蛋白胨10g,氯化钠40g，蒸馏水1L。
将新鲜牛肉去除脂肪、筋膜，切成小块后用绞肉机绞碎，称取500g加水1L混合后置冰箱浸泡过夜；将肉浸液煮沸30min，然后用麻布或绒布挤压过滤；加入蛋白胨、氯化钠后加热溶解，并补足因蒸发而失去的水分，调整pH至7.4~7.6；用滤纸过滤后分装小瓶，121℃灭菌15~20min。
2.高渗糖液体增菌培养基
[用途]
用于血液、骨髓、胸水等标本的L型细菌增菌培养。
[配法]
新鲜牛肉500g，蛋白胨10g,氯化钠30g，蔗糖150g，蒸馏水1L。
同上述高渗盐培养基，唯高压蒸汽灭菌时采用115℃ 20min，以免蔗糖分解。
[用法]
取血液5ml及其它标本直接种于高盐、高渗糖液体培养基，置35℃培养l~7 天，每天观察细菌生长情况。在上述增菌培养基上， L型细菌呈颗粒状生长，颗粒可粘附于管壁或沉淀于管底。
[质量控制]
金黄色葡萄球菌L型生长良好。
(二)L型增菌培养基
[用途]
用于血液、脑脊液等体液标本中L型细菌的增殖培养。
[配法]
⑴ 牛肉浸液1L,氯化钠30~40g,蛋白胨(优质)20g.
⑵ 牛肉浸液1L，氯化钠30g，蔗糖150g，蛋白胨20g。
将各成分称量混合加热溶解后，校正pH至7.4~7.6，分装培养瓶，每瓶15m1，121℃灭菌15min备用。
[用法]
用无菌操作采集标本，立即接种于L型细菌液体培养基和常规血液增菌培养基内，标本与培养基之比为1︰10，置35℃培养3~7 天，逐日观察。如发现培养液产生混浊、溶血、絮状沉淀或瓶壁上附有粘性颗粒等细菌生长现象，立即分离至L型细菌分离平板上进行鉴定。
[质量控制]
用L型细菌做生长试验，培养24~72h，生长良好。
[保存]
置4℃冰箱内使用l~2周。
二、L型细菌分离琼脂培养基
[用途]
用于常见L型细菌的分离培养。
1.Kaqan分离平板
[配法]
牛肉浸液800m1，氯化钠50g，蛋白胨(OXoid)20g，琼脂粉(Oxoid)8g，血浆(人、马、羊)200m1。
将前四种成分称量混合加热溶解，校正pH 至7.5±0.1，分装每瓶80m1，121℃灭菌15min冷藏备用。
临用时加热溶解后，冷却至56℃加入血浆20ml摇匀倾注平板。放在密封塑料袋中，置4℃冰箱备用。
注：血浆要预先灭菌处理，并经56℃水浴灭活30min。
2．蚌埠85-7分离平板
[配法]
牛肉浸液1L，氯化钠40g，蛋白胨30g，明胶(生物试剂)30g，琼脂粉5~8g。
将上述成分混合，加热溶解，校正pH 至7.4~7.6，分装后，经121℃灭菌15min后倾注平板，置4℃冰箱备用。
[用法]
将血、脑脊液、尿等标本或增菌培养物滴种于平板约0.1m1，用L型玻棒均匀涂开，置35℃温箱内启盖片刻，除去平板表面水分。在平板的边端贴一片专用诱导纸片。覆盖后置35℃10
%二氧化碳环境下3~5
天，逐日观察。如有可疑L型菌落，用低倍镜检查。在诱导区与非诱导区同时见到L型菌落说明标本内确有L型细菌存在；若诱导区存在L型菌落，而非诱导区无，则提示标本内有L型细菌变异的趋向。
[质量控制]
⑴ 细菌诱导试验，在该平板上能诱导金黄色葡萄球菌CowengⅠ标准菌株出现L型菌落和G型菌落。
⑵ 用L型菌落作10-7稀释，取0.1ml接种，经培养获得单个菌落和纯培养。
[保存]
置4℃冰箱内，2周用完。
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