一、固定的目的和意义
活体组织一旦停止血液循环和物质代谢就会因物质代谢障碍产生一系列的生物化学和组织化学改变，并导致形态学上可见的细胞器变化和细胞组织的形态改变直至腐
败自溶。固定的目的就是要通过使用化学和物理的方法，尽可能地保存组织细胞离体时具有的生理和病理形态结构及生物化学和免疫化学成分。
良好的固定是制作优秀病理切片的基础，也是特殊染色、组织化学、免疫组织化学和组织原位分子杂交等技术方法赖以成功的基础。
因此，在病理技术工作中必须高度重视固定的质量。
二、组织固定的注意事项
1．及时取材：由于甲醛对组织的平均穿透速度只有0.8 mm/h，因此手术切除的送检标本应及时切开进行取材，以便保证重要的镜检部位能及时地得到固定。
2．及时固定：完成取材的组织块应立即投入固定液以便尽可能地保存组织细胞的形态结构和抗原性。
3．液量充分：一般情况下要求固定液的量应为组织体积的6～10倍。
4．适度固定：现代固定的要求是，在良好保存组织细胞形态结构的同时尽可能较好地保存组织细胞的抗原性。长时间的固定会导致某些组织抗原性的逐渐丧失，因
此，适时固定可以在保存细胞结构和抗原性之间取得必要的平衡。对于较大的送检标本而言，在及时切开固定的基础上，应尽可能在24
h以内取材进入组织脱水程序。
5．适宜温度：低温可以降低固定的速度，反之可以加快固定进程。在自动组织脱水机上可以施加恒定的温度使得在有限的时间内可以完成固定过程。一般情况下应将固定温度控制在36~38℃。
6．适当搅拌：在自动组织脱水机上可以通过使用搅拌和试剂循环功能使固定过程在标本与试剂充分接触的条件下完成。
三、固定液的选择
影响标本固定的因素很多，如组织与固定液的比例、固定时间、固定温度等；除此之外，固定液本身也很重要，若所选固定液不当，细胞内蛋白质、脂类、核酸等成
分将会有不同程度地损失。固定剂最好随配随用，并注意其浓度和酸碱度。因此根据实际工作的目的，选用合适的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方
法及适用范围。
1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以
pH
7．2～7．4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不
超过一个月。
甲醛(40%) 100 ml
无水磷酸氢二钠 6.5 g
磷酸二氢钠 4.0g
蒸馏水 900 ml
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多聚甲醛：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
甲醛(40％) 100 ml
95％乙醇 900 ml
(2)B5(醋酸钠一升汞一甲醛)固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。
无水醋酸钠 1.25 g
升汞 6.0 g
蒸馏水 90 ml
使用前加入甲醛 10 ml
(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
饱和苦味酸水溶液(约1.22%) 75 ml
甲醛 25 ml
冰醋酸 5 ml
(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
无水乙醇 60 ml
氯仿 30 ml
冰醋酸 10 ml
(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。
升汞 5.0 g
重铬酸钾 2.5 g
硫酸钠 1.0g
蒸馏水(加至) 100 ml
四、操作方法
临床医师切取标本后，应尽快将标本置于盛有足够量固定液的容器内，尽量避免可能出现固定不及时或不充分导致标本干涸或腐败，无法进行切片制作。病理科工作
人员验收标本后，必须对临床初步固定的标本及时进行规范的处理：对于穿刺及胃肠镜所取的小标本，直接添加中性甲醛，添加的量应6～10倍于标本体积；对于
较大的手术切除标本应呈书页状切开、有包膜的标本切开固定，切开的厚度1
cm左右，为了保存标本的原有大体形态，切开时最好不要完全断开，两切面之间用脱脂棉或纱布隔开，然后放人6～10倍体积的固定液中完全淹没。特殊标本特
殊处理：如脾脏或淋巴结等包膜较厚，固定剂渗透力有限，应切薄薄的一小片单独固定，对于宫颈锥切标本及胃肠等空腔器官应及时钉板展开固定。固定到取材的时
间应视标本的大小及切面的厚度而定，小标本应不少于4 h,大标本不少于18 h。
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