分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

电泳技术基本原理和影响电泳速度的因素-1

2020.9.07
头像

王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

电泳是指带电粒子在电场中向异性电极移动的现象。例如蛋白质具有两性电离性质,当溶液pH值大于蛋白质等电点时,蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,反之则带正电荷,向负极移动。当蛋白质溶液pH值与蛋白质的等电点相等,静电荷为零则不移动。

电泳技术常以有无支持物来分类。电泳中不用支持物在溶液中进行的电泳称为自由电泳,反之,有支持物的电泳称为区带电泳。在区带电泳中所用支持物不同常有不同的名称。例如:纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳,琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。另外,也有以所用电压分为:低电压电泳,高电压电泳;以支持物形状分为:薄层电泳,平板电泳(水平平板电泳,垂直平板电泳),圆盘电泳,毛细管电泳;以用途分为:分析电泳,制备电泳,定量免疫电泳;以区带形式分为:盘状电泳,火箭电泳等。



各种电泳技术具有以下特点:①凡是带电物质均可应用某一电泳技术进行分离,并可进行定性或定量分析;②样品用量极少;③设备简单;④可在常温进行;⑤操作简便省时;⑥分辨率高。日前电泳技术已经广泛应用于基础理论研究、临床诊断及工业制造等方面。例如用醋酸纤维薄膜电泳分析血清蛋白;用琼脂对流免疫电泳分析病人血清,为原发性肝癌的早期诊断提供依据;用高压电泳研究蛋白质核酸的一级结构;用具有高分辨率的凝胶电泳分离酶、蛋白质、核酸等大分子的研究工作,对生物化学与分子生物学的发展起了重要作用。

基本原理

一、电荷的来源

任何物质由于其本身的解离作用或表面上吸附其他带电质点,在电场中便会向一定的电极移动。作为带电颗粒可以是小的离子,也可是生物大分子,蛋白质、核酸、病毒颗粒、细胞器等。因蛋白质分子是由氨基酸组成的,而氨基酸带有可解离的氨基(-NH+3)和羧基(-COO-),是典型的两性电解质,在一定的pH条件下就会解离带电。带电的性质和多少取决于蛋白质分子的性质及溶液的pH值和离子强度。在某一pH条件下,蛋白质分子所带的正电荷数恰好等于负电荷数,即净电荷等于零,此时蛋白质质点在电场中不移动,溶液的这一pH值,称为该蛋白质的等电点(pI)。如果溶液的pH值大于pI,则蛋白质分子会解离出H+而带负电,此时蛋白质分子在电场中向正极移动。其示意图如下(图3-1)。

二、迁移率

设一带电粒子在电场中所受的力为F,F的大小决定于粒子所带电荷Q和电场强度X,即:

F=QX

又按Stoke氏定律,一球形的粒子运动时所受到的阻力F′,与粒子运动的速度V,粒子的半径r,介质的粘度η的关系为:

F′=6πrηV

当电泳达到平衡,带电粒子在电场作匀速运动时,则:

F = F′

亦即:QX=6πrηV

移项得:

3-1

V /X表示单位电场强度时粒子运动的速度,称为迁移率(mobility),也称为泳动度,以U表示

3-2

由式(3-2)可见粒子的迁移率在一定条件下决定于粒子本身的性质,即其所带电荷以及其大小和形状,亦即决定于粒子的电荷密度,两种不同的粒子(如两种蛋白质分子)一般有不同的迁称率。在具体实验中,移动速度V为单位时间t(以秒计)内移动的距离d(以厘米),即:


又电场强度X为单位距离L(以厘米计)内的电势差E(以伏特计),即:

X=E/L

以V=d/t,X=E/1代入(3-2)式即得:


所以迁移率的单位为厘米2,秒-1,伏特-1。


互联网
仪器推荐
文章推荐