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糖的呈色反应(color reaction)和定性鉴定(2)

2020.9.07
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

试剂
试剂甲:称取34.5g硫酸铜溶于500mL蒸馏水中。
试剂乙:称取125g NaOH 137g酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中,贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。临用前,将试剂甲和试剂乙等量混合。
1%葡萄糖溶液;1%蔗糖溶液;1%淀粉溶液。
操作方法
取试管,编号,各加入Fehlin试剂甲和乙1mL。摇匀后,分别加入4滴待测糖溶液,置沸水浴中加热2 ~ 3min,取出冷却,观察沉淀和颜色变化。
Ⅴ. Benedict试验
实验原理
Benedict试剂是Fehling试剂的改良。Benedict试剂利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂,其碱性较Fehling试剂弱,灵敏度高,干扰因素少。
试剂
Benedict试剂:将170g 柠檬酸钠和100g 无水碳酸钠溶于800mL水中;另将17g硫酸铜溶于100mL热水中。将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中,边加边搅,最后定容至 1000mL。 该试剂可长期使用。
1%葡萄糖溶液;1%蔗糖溶液;1%淀粉溶液。
操作方法
取试管,编号,分别加入2mL Benedict试剂和4滴待测糖溶液,沸水浴中加热5分钟,取出后冷却,观察各管中的颜色变化。
Ⅵ. Barfoed试验
实验原理
在酸性溶液中,单糖和还原二糖的还原速度有明显差异。Barfoed试剂为弱酸性。单糖在Barfoed试剂的作用下能将Cu2+还原成砖红色的氧化亚铜,时间约为3分钟,而还原二糖则需20分钟左右。所以,该反应可用于区别单糖和还原二糖。当加热时间过长,非还原性二糖经水解后也能呈现阳性反应。
试剂
Barfoed试剂:16.7g 乙酸铜溶于近200mL水中,加1.5mL冰醋酸,定容至250mL即可。
1%葡萄糖溶液;1%蔗糖溶液;1%淀粉溶液。
操作方法
取试管,编号,分别加入2mL Barfoed试剂和2 ~ 3滴待测糖溶液,煮沸2-3分钟,放置20分钟以上,比较各管的颜色变化。
注意事项
(1)Molish反应非常灵敏,0.001%葡萄糖和0.0001%蔗糖即能呈现阳性反应。因此,不可在样品中混入纸屑等杂物。当果糖浓度过高时,由于浓硫酸对它的焦化作用,将呈现红色及褐色而不呈紫色,需稀释后再做。
(2)果糖与Seliwanoff试剂反应非常迅速,呈鲜红色,而葡萄糖所需时间较长,且只能产生黄色至淡黄色。戊糖亦与Seliwanoff试剂反应,戊糖经酸脱水生成糠醛,与间苯二酚缩合,生成绿色至蓝色产物。
(3)酮基本身没有还原性,只有在变成烯醇式后,才显示还原作用。
(4)糖的还原作用生成氧化亚铜沉淀的颜色决定于颗粒的大小,Cu2O颗粒的大小又决定于反应速度。反应速度快时,生成的Cu2O颗粒较小,呈黄绿色;反应速度慢时,生成的Cu2O颗粒较大,呈红色。溶液中还原糖的浓度可以从生成沉淀的多少来估计,而不能依据沉淀的颜色来判断。
(5)Barfoed 反应产生的Cu2O沉淀聚集在试管底部,溶液仍为深蓝色。应注意观察试管底部红色的出现。

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