淀粉酶的活力测定

原理

淀粉被淀粉水解，切断淀粉链的α-1，4糖苷键，对碘呈蓝紫色的反应消失，这种呈色消逝的速度可以表示水解的程度，因而能衡量酶的活力。

操作方法

1、取试管1支，加20毫升2%淀粉，混匀，在30℃水浴中，使管内温度达到30℃。

2、将淀粉酶0.5ml加到30℃的淀粉液中，混匀，在30℃水浴中保温，自加入记时，经5 分钟后取反应液1毫升，加入盛有5毫升稀碘液的试管中。混匀，目测比色，每隔一定时间重复测定，直至呈色与标准比色颜色相同为止，记录反应进行的时间。

3、计算。在上述条件下，每一小时催化1毫升2%可溶性淀粉水解的酶量，定为一个酶活力单位。

试剂和器材

一、试剂

（1）碘原液：称取碘11克，碘化钾22克，加水溶解，稀释至500毫升。

（2）稀碘液：取碘原液2毫升，加碘化钾20克，稀释至500毫升，此试剂随配随用。

（3）2%淀粉液：称取干燥过的可溶性淀粉2克，加5毫升蒸馏水，搅拌混和，再徐徐倾入70毫升煮沸的蒸馏水中。继续煮沸2分钟，冷却至室温，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（PH为6）

（4）柠檬酸缓冲液：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）45.23克，柠檬酸（C6H8O7·H2O）8.068克，加水溶解，稀释至1000毫升。

（5）标准比色液：称取氯化钴（CoCL2·6H2O）25克和重铬酸钾3.34克溶于100毫升0.01N HCL，其五倍稀释作标准。

（6）样品：细菌-α淀粉酶

二、器材

（1）电热恒温水浴 （2）试管

（3）量筒 （4）吸量管（1ml）。