4、培养后的OD值。其实这并一个非常重要的参数，只是当OD值大到一定的程度后，菌体要保持对数生长已经不太可能，因此很多指导方法上强调OD不得大于0.6，0.8等等。同时，OD值大时菌体总量大，因而感受态绝对数量要大一点，因而需要在OD值的两方面影响中找一个平衡点。
5、培养基中的各种离子。经验证明，当培养基中存在一定量的Mg2 离子时，该方法制得的感受态要相对较高。在制备普通感受时，使用20mM MgCl2做为培养基的添加物，在感受态收获之前20-30分钟加入，会收到很好的效果。
6、培养温度。文献及经验告诉我们，较低的温度培养有利于感受态的形成，这样可以获得较高的感受态，但太低又不实用，因而产生了Inoue的高效感受态制备方法，它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一个非常理想方法。
7、此外文献报道，在保存感受态时，DMSO要比甘油的效果要好，它会使感受态的效率增加。
8、液氮速冻也会使感受态的效率提高，因此推荐用液氮速冻感受态，然后保存于超低温冰箱内。至于在液氮中保存12小时以后再转入超低温冰箱，这点未做实验，只是一种感觉，第一次这样做了，没问题，以后就照此办理而已。
方法二
1.液氮或低温冰箱中取出的大肠杆菌*E.COLI DH5，JM109，HB101等，在LB平板上划线，37度过夜至长出单菌落。
2.挑直径1-3毫米的单菌落*可多个，接种到250毫升/3升锥形瓶 或80毫升/1升锥形瓶的SOB培养基. 培养基量不可再多，会影响效率。
3.在18度150-250RPM 培养19-50小时*没有冷却摇床的可在室温，但不可高于37度。
4.OD600约0.4-0.8时停止培养，放在冰水中冷却10分钟。
5. 4度，300RPM离心15分钟，回收菌体。
6.去掉上清后，用1/3体积的冰冷TB溶液悬浮，在冷10分钟。
7.再次离心回收菌体。
8.用1/12.5体积的TB悬浮，添加最终浓度为7%的DMSO，再冷却10分钟。
9.0.1 -1毫升分装，直接在液氮中冻上。
10.在液氮或-80度保存。
【zihudie 】
（1）将置于液氮保存的大肠杆菌划线在LB平板上，37℃培养活化。
（2）挑取经活化的大肠杆菌单菌落于SOC液体培养基，18℃，200-250rpm培养。
（3）当OD600=0.5-0.8时，用预冷的40mL离心管于4℃，8000rpm离心10min，收集菌体。
（4）用预冷的TB Buffer重悬菌体，4℃，8000rpm离心10min，收集菌体。
（5）重复第4步操作。
（6）用8mL预冷的TB Buffer重悬菌体，缓慢加入DMSO至终浓度7% 。
（7）冰浴10min后，分装保存于液氮中。
本法效率极高，建议大家采纳
【yog】
1. 单菌落-------2ml LB 37度 120RPM过夜------1%转接-------37度 200RPM2小时(OD到0.4~0.5)
2. 2ml，冰浴15min，4度，6000RPM 5min，弃上清，悬浮于1ml0.1MCaCl2 中，冰浴20min
3. 4度，6000RPM 10min，重悬浮于200μl0.1MCaCl2中，冰浴30min
建议用TSS法，简单方便，比氯化钙法的转化效率高.别的菌可能不一定适用。
以下为转贴，具体方法请最好查阅文献。
E.coli感受态细胞制备方法:
单菌落平板至2ml LB，37℃ 250 r/m，1ml 转至50 ml LB，37℃ 250 r/m至 A600=0.2-0.4
离心后用10毫升TSS重悬后，分装 -70℃保存。尽量冰上操作.
转化: 加质粒(<5 ul/100μlcell) 后冰上30分钟，42℃ 90秒，冰上2分钟，加LB至1ml，37℃ 1小时后铺抗生素平板。
TSS:
7.0ml pH6.1 LB
2.0ml 50% PEG6000
0.5ML dmso
0.2ML Mg2 (0.1ml 1mol/l MgCl2 and 0.1ml 1mol/l MgSO4)
0.3ml ddH2O
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