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UPLC检测器校验

2020.9.11
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coconut

天道酬勤

  VWD检测器或TUV/DAD/PDA检测器

  (1)波长准确度

  ①原理

  检测器的波长准确度是一个关键性参数,尤其当测定有关物质含量时,波长不准确可能直接影响有关物质的相对响应因子。

  ②接受标准

  VWD或TUV/DAD/PDA(咖啡因):(205、245、273)±2nm;

  (2)基线噪音和漂移

  ①原理

  基线噪音直接影响样品杂质的检测限度,而线性对于纯度测定和含量测定的准确度具有决定性意义。

  ②可接受标准

  安捷伦操作系统:

  基线噪音≤0.1mAU

  基线漂移≤5mAU/Hr(基线漂移有正负,取绝对值)

  Waters操作系统(empower):

  平均峰到峰≤1×10-4 AU

  检测器漂移≤5×10-3AU/Hr(基线漂移有正负,取绝对值)

  岛津操作系统基线噪音≤100μV

  基线漂移≤2500μV /30min

  (3)检测器线性

  ①原理

  定量测定时,在一定浓度范围内检测器的响应必须与样品浓度成线性。

  ②可接受标准

  检测器的响应应当与样品浓度成线性:

  峰面积之于进样浓度的相关系数r≥0.9990。

  ③测定方法

  试剂:咖啡因UPLC甲醇超纯水

  测试溶液

  A.方法一

  贮备液的配制:精密称取15.5mg固体咖啡因标准品,置25ml棕色量瓶中,用超纯水溶解并稀释至刻度。

  B.方法二:

  贮备液:0.5mg/ml的液体咖啡因标准品

  操作步骤

  设置进样序列:在样品盘中任意放置进样瓶,在工作站上设置序列进样,处理色谱图并打印处理结果。

  计算

  所有计算都应当采用应用软件计算。本节的目的是说明如何判断结果。

  结果判断

  测试活动应当被记录在仪器使用记录中,测试结果记录在校验记录中。

  (二)RID检测器

  测试项目:基线噪音,检测器线性,检测器定量限,检测器检测限

  ①原理

  基线噪音直接影响样品杂质的检测限度,而线性对于纯度测定和含量测定的准确度具有决定性意义。

  ②可接受标准

  基线噪音:≤10nRIU

  基线漂移:≤400nRIU/Hr(基线漂移有正负,取绝对值)

  甘油检测限:≤5×10-3mg/ml(即:此浓度下S/N≥3)

  甘油定量限:≤1.5×10-2mg/ml(即:此浓度下S/N≥10)

  线性:r≥0.9990,浓度与峰面积的比值的RSD≤5.0%

  ③测定方法

  仪器设备:电子天平、容量瓶和移液管

  试剂:甘油(AR)超纯水

  测试溶液

  贮备溶液:取甘油625mg,精密称定,置50ml棕色量瓶中,用超纯水溶解并稀释至刻度。

  线性标准溶液:见下表

  STD-1(0.5mg/ml)、STD-2(1.0mg/ml)、STD-3(1.5mg/ml)、STD-4(2.5mg/ml) 、STD-5(5.0mg/ml)。

  检测限和定量限测定标准溶液:

  检测限测定标准溶液STD-D:精密量取STD-1标准溶液1.0ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度。

  定量限测定标准溶液STD-Q:精密量取STD-1标准溶液3.0ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度。

  操作步骤

  进样序列:依次测定基线噪音和漂移、检测限和定量限、线性,处理色谱图并打印处理结果。

  计算

  所有计算都应当采用应用软件计算。本节的目的是说明如何判断结果。

  基线噪音和漂移:使用工作站自带软件计算基线噪音和漂移。

  定量限和检测限测定:使用工作站自带软件计算甘油色谱峰的信噪比。

  检测器线性:计算峰面积与进样浓度的比值的RSD;峰面积之于进样浓度的相关系数r。

  仪器与工作站:仪器应当能与工作站正常连接,工作站应当能正常采集数据、处理数据和打印结果。

  (三)荧光检测器

  (1)波长准确度

  ①原理

  检测器的波长准确度是一个关键性参数,尤其当测定有关物质含量时,波长不准确可能直接影响有关物质的相对响应因子。

  ②可接受标准

  水拉曼峰:397±3nm

  ③测定方法

  直接在控制面板上操作,记录结果。

  (2)基线噪音

  ①原理

  基线噪音直接影响样品杂质的检测限度,而线性对于纯度测定和含量测定的准确度具有决定性意义。

  ②接受标准

  平均峰到峰(PTOP)≤1.0EU

  检测器漂移≤10.0EU/Hr

  ③测定方法

  仪器设备:阻尼管(50cm“length”×0.005“ID”)

  试剂:超纯水

  操作过程

  开启仪器,如上设置色谱条件,预热30分钟

  运行方法,采集30分钟信号

  计算

  工作站处理色谱图,选择合适模板打印色谱图。

  结果判断

  测试活动应当被记录在仪器使用记录中,测试结果记录在校验记录中。

  (3)检测器线性

  ①原理

  定量测定时,在一定浓度范围内检测器的响应必须与样品浓度成线性。

  ②可接受标准

  检测器的响应应当与样品浓度成线性:

  进样浓度与峰面积的比值的RSD≤5.0%;峰面积之于进样浓度的相关系数r≥0.9990。

  ③测定方法

  仪器设备:无

  试剂:萘UPLC甲醇超纯水

  测试溶液

  标准液的配制:精密称取10.0mg萘对照,置100ml棕色量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度。精密移取1ml至100ml容量瓶,用甲醇定容。

  进样序列:依次测定检测器线性,进样残留。处理色谱图并打印处理结果。

  操作步骤

  设置进样序列:在样品盘中任意放置进样瓶,在工作站上设置序列进样,处理色谱图并打印处理结果。

  计算

  所有计算都应当采用应用软件计算。此处目的是说明如何判断结果。

  检测器线性:计算进样浓度与峰面积的比值的RSD;峰面积之于进样浓度的相关系数r。

  仪器与应用软件连接:仪器与用软件之间的连接正常。采集、处理和报告数据正常。

  (四)蒸发光散射检测器

  测试项目:重新性、基线噪音

  ①原理

  基线噪音直接影响样品杂质的检测限度,而重现性对于测定的准确度具有决定性意义。

  ②可接受标准

  定性重复性应≤1.5%;

  定量重复性应≤4.0%

  基线噪音应≤1mv

  基线漂移应≤5mv/30min

  最小检测浓度≤5×10-6g/ml胆固醇-甲醇溶液

  ③测试条件

  仪器设备:超高效液相色谱仪

  标准溶液

  STD1:5.0ug/ml (5×10-6g/m L) 的甲醇中胆固醇溶液,取200μg/ mL甲醇中胆固醇溶液0.5ml,置20ml容量瓶中,加甲醇溶解定容至刻度,摇匀即可。

  STD2:200μg/ mL甲醇中胆固醇溶液,可以直接购买标准溶液或自己配制。

  200μg/ mL甲醇中胆固醇溶液的配制:精密称取20mg胆固醇,置100ml容量瓶中,加甲醇溶解定容至刻度,摇匀即可。

  操作过程

  开启仪器,如上设置色谱条件,预热30分钟,按下述序列进样,记录色谱图。

  结果判断

  测试活动应当被记录在仪器使用记录中,测试结果记录在校验就中。


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