一、原理
大肠杆菌l噬菌体的DNA，既可以自主存在于宿主菌中，也可以整合在细菌染色体中，完成溶源化过程。多数温和噬菌体整合进细菌染色体中时都有一特定的位置。大肠杆菌l噬菌体的原噬菌体附着在寄主染色体半乳糖操纵子基因gall被诱导出来时，大约106个l噬菌体中有一个被反常切除，而携带半乳糖或生物素基因脱离寄主染色体。这种噬菌体除了带有染色体上半乳糖基因之外，还带有一部分噬菌体自身的染色体，因而被称为缺陷型半乳糖转导噬菌体(l
defective
galactose)，记为ldg。如果lDNA携带的是bio，则为ldb噬菌体。由ldg噬菌体转导即是一种局限性转导，转导子大部分是一种不稳定的gal-/gal+(l)局部二倍体或被称为不稳定的杂合因子。和生物素合成基因bio之间，这一附着位置表示为BOB’，而λ噬菌体的附着位点表示POP’。BOB’和POP’都有相同的“核心序列”区，由15个核苷酸组成，噬菌体DNA和细菌DNA就是通过O区的单交换而发生整合，形成溶源菌。当溶源菌中的原噬菌体
二、目的
了解大肠杆菌l噬菌体局限性转导的现象，掌握研究局限性转导的基本原理和方法。
三、材料、试剂和器具
1、溶源菌：E. coli K12(l)gal+(染色体半乳糖基因旁整合含有l原噬菌体)。
2、受体菌：E. coli K12 Sgal-（为染色体上半乳糖基因缺陷型）
3、LB液体培养基、固体培养，2×LB液体培养基，0.8%半固体琼脂、半乳糖EMB培养基。
4、磷酸缓冲液(pH 7.0)。
5、氯仿。
6、培养皿、三角瓶、试管、离心管、吸管、玻璃涂棒。
四、操作步骤
（一）l噬菌体的诱导和裂解液的制备
1、第一天，取一环溶源菌接种于盛有5ml LB的三角瓶内，置37℃培养16小时。
2、第二天，取培养后的菌液0.5ml加入盛有4.5ml LB的三角瓶内，继续在37℃培养4－6小时。
3、将以上培养后的菌液移入离心管中，3500rpm离心10分钟，弃上清液，加入4ml磷酸缓冲液悬浮。
4、取上述菌悬液3ml加在灭过菌的培养皿中，紫外线照射10－15秒钟（15W，距离40cm），使噬菌体由整合态转变为游离态。
5、加入3ml 2×LB液体培养基，37℃避光培养2－3小时。
6、将避光培养后的菌液移入离心管中，3500rpm离心10分钟，将上清液转入另一无菌的离心管中。
7、在上清液中再加入0.2ml氯仿（约4－5滴），剧烈振荡半分钟，静置5分钟。
8、将上清液转入另一无菌试管，4℃保存备用。
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