动脉粥样硬化患者VSMC的提取实验材料和步骤

实验材料：

眼科剪刀1把 眼科镊子2把 1×PBS约200ml M199培养液 离心机 5ml小皿 10ml大皿

实验步骤：

1、在超净台内用10ml的离心管分装5ml的1×PBS（已高压灭菌）。

2、手术台上取患者发生动脉粥样硬化改变的病变动脉，分放入准备好的PBS中，拿回实验室在超净台中，无菌条件下剥去外膜，用手术刀片刮去内膜，留下中膜并将其剪成1×1mm大小组织块。

3、消化法：PBS清洗组织块后并将其转移入10ml的离心管，加入0.125％胰酶消化37℃30分钟，室温吹打100分钟或者振荡器振荡100 分钟，待组织块变小且消化液变粘时，收集消化液配平以1500转/分钟离心10分钟后，收集细胞种植于预先加入M199培养液的5ml小皿中放入37度 5％CO2的培养箱中。

4、贴块法：PBS清洗组织块后移入已准备好的10ml大皿中，块间距为0.5cm，放入37度5％CO2的培养箱中，3小时后，待组织块贴壁后，再加入2ml培养液后放回37度5％CO2的培养箱中。

注意：最后加入2ml培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下，勿使组织块吹下。

5、随后每3天予以半量换液。

6、一周后可见组织块周围有细胞爬出，大约3周后80％融合。