实验概要
抗补体试验是根据血清中存在的免疫复合物能结合C1的特性，将已知量的豚鼠补体先与经56℃灭活补体的被检血清一起温育，然后加入致敏红细胞，观察其溶血程度，如果被检血清中含有免疫复合物就能消耗补体，致使致敏红细胞的溶血程度明显减弱。抗补体试验很敏感，可测得0.1～0.5ng/ml的免疫复合物。
主要试剂
pH值74巴比妥缓冲液(有钙、镁和无钙、镁两种)。
主要设备
72型分光光度计、电热恒温水浴箱(37～65℃)、离心机等。
实验材料
1. 绵羊红细胞新鲜羊血液脱纤，与抗凝保存液混匀后，分装于10ml玻璃试管，置4℃冰箱内保存，可达3周左右。
2. 溶血素以绵羊红细胞免疫家兔后，所获得的兔抗羊红细胞免疫血清。
3. 豚鼠补体取4～5只豚鼠，心脏采血，每只4～5ml，分离血清，混合后分装安瓿瓶，冷冻干燥保存。
实验步骤
1. 2%致敏绵羊红细胞的制备
4%绵羊红细胞：将抗凝保存的绵羊红细胞以10倍于压积绵羊红细胞容积的生理盐水洗涤2次，每次2500 r/min离心5min，第3次以pH值7.4巴比妥缓冲液应用液(不含钙、镁)洗涤，以后尽可能的吸去上清液，以压积红细胞制备4%绵羊红细胞悬液。为了使红细胞悬液标准化，取0.1ml 4%绵羊红细胞悬液加入5ml、pH值7.4巴比妥缓冲液应用液(不含钙、镁)，以72型分光光度计读数(波长542nm，1cm比色杯)，透光率应为40%，否则应予以调节。也可采用半溶管光密度数作调节，即将0.5ml 4%绵羊红细胞悬液加入95ml蒸馏水，于72型分光光度计读数(波长542nm，05cm比杯色)，光密度数应为0.20左右。
2. 单位溶血素
1) 将已知效价的溶血素用pH值7.4巴比妥缓冲液(不含钙、镁)稀释为2单位。将4%绵羊红细胞悬液与2单位溶血素等量混合，即为2%致敏绵羊红细胞。
2) 2单位豚鼠补体的配制
将低温保存已知效价的豚鼠血清用pH值7.4巴比妥缓冲液(不含钙、镁)稀释为2单位，及与其相邻近值的2管，共3管。如豚鼠补体效价为100单位/ml，可分别作1∶50(2单位)、1∶40及1∶60稀释，分别取0.3ml，然后依次操作：
a. 加入0.3ml pH值7.4巴比妥缓冲液(不含钙、镁)，4℃ 60min；
b. 加入0.3ml 2%致敏绵羊红细胞悬液，37℃作用15min；
c. 再加入3ml同样缓冲液，混匀后，2500 r/min离心5min，取上清液以72型分光光度计读数(波长542nm，比色杯05cm)，选择光密度在0.1～0.13管为最适宜豚鼠补体稀释倍数。
3) 测定：
a. 取0.15ml待检血清，56℃灭活60min；
b. 加入0.15ml pH值7.4巴比妥缓冲液(不含钙、镁)及0.3ml豚鼠血清(2单位左右)，4℃ 60min，使之充分作用；
c. 加入0.3ml 2%致敏绵羊红细胞，37℃ 15min；
d. 加入3ml同样缓冲液，混匀后，2 500 r/min离心15min，取上清液以72型分光光度计读数。每次测定须设有阳性、阴性血清对照及空白对照(以0.15ml缓冲液替代血清)。测定管光密度数低于空白管对照50%以下者判为阳性。
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