SABC法亲和素与生物素系统的操作流程

实验概要

本实验介绍了SABC法亲和素与生物素系统的操作步骤。

实验原理

SABC法或称S-P法、LSAB法，它是采用生物素标记的第二抗体与结合有HRP或AKP酶的链霉亲和素(streptavidin)连接来测定细胞及组织中的抗原。链霉亲和素是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质，相对分子质量60000，不含糖链，等电点pI为6.0～6.5。链霉亲和素同一定浓度的生物素化酶混合后，就能形成链霉亲和素-酶复合物，这种复合物中至少存在1个尚未被生物素占据的亲和素结合位点，可以和各种生物素标记抗体结合。由于采用了改良的亲和纯化技术和酶标技术，LSAB法敏感性更高、背景更清晰。

实验步骤

1. 石蜡切片常规脱蜡至水，PBS洗3X3min。

2. IHC的前处理视特异性一抗不同，可采用蛋白酶消化或热诱导的微波抗原修复(AR)，PBS洗3X3min。

3. 3％过氧化氢孵育10min(可省略)，以阻断内源性过氧化物酶活性。

4. PBS洗3X3min。

5. 10％非免疫性动物血清孵育10min(可省略)，以减少非特异性背景，无需冲洗，只需吸去多余血清。

6. 滴加适当稀释的第一抗体，37℃孵育60min或4℃过夜。

7. PBS洗3X3min。

8. 滴加生物素标记的二抗，37℃孵育30～60min。

9. PBS洗3X3min。

10. 滴加过氧化物酶标记的链霉亲和素，室温孵育30min。

11. PBS洗3X3min。

12. 0.04％DAB(含0.03％H₂O₂)显色5～10min。

13. 复染，脱水，常规树胶封固，结果观察。