分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

PRIMO使用技巧与应用细节问答(一)

2021.2.23
头像

王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

 
问1:与其他微图案化(Micropatterning)技术相比,PRIMO的光照图案化(Photopatterning)技术的优势有哪些?
答:PRIMO的解决方案给研究者提供实验操作的完全的自由度和全面的控制,使其可以很容易的优化实验条件。PRIMO可以快速建立任意形状的蛋白图案,以便精确的匹配或重叠不同的蛋白(可以无限制的使用多达3种蛋白,取决于使用的蛋白的种类和它们的相互作用),并控制吸附在基质上的局部的蛋白的密度。
 
问2:PRIMO可用于哪些应用?
答:(1)基质上的2D光图案化(2D photopatterning on substrate);
(2)3D微结构上的光图案化(Photopatterning on 3D microstructures);
(3)微制造(Microfabrication),如微流道芯片(microfluidic chip)制造。
 
问3:用PRIMO解决方案创建一个蛋白图案要多少时间?
答:创建一个图案(不包括图案设计步骤)的总体时间大概在10-15min。光照的时间各不相同,并且必须根据投射的图案和使用的物镜进行优化。在每次用UV照射并降解抗污聚合物涂层(anti-fouling polymer)(抗粘附)的步骤之后,都需要大概5min以便蛋白能吸附在图案上(时间随着放置在基质上的蛋白浓度的不同而变化)。
 
问4:细胞图案能稳定多久?
答:细胞图案的稳定的时间长度取决于使用的基质和培养的细胞类型。在一定的条件下,细胞能粘附在蛋白图案上长达2周。我们的研发团队会定期开发一些新的实验步骤供我们的用户选择。
 
问5:用PRIMO能否在水凝胶上打印出蛋白图案?
答:我们建议采取转移的技术(transfer technique),用PRIMO在载玻片上打印蛋白图案,再将载玻片放置在水凝胶上然后移除。如果用UV照射将蛋白光图案化到水凝胶上,往往会改变水凝胶的物理特性,然后改变一开始设定的实验条件。
 
问6:载玻片能提前包被吗?
答:我们推荐在同一天进行蛋白包被。然而,我们的研发团队也针对特定的基质定期开发新的实验方案,使保存用蛋白包被好的载玻片以供后用成为可能。
 
问7:为什么表面处理对于光照图案法很重要?
答:光照图案法是一个“减法”技术。它的首要目标是使用抗污聚合物包被基质,这样可以防止分子和细胞的粘附。然后在UV光和光活化试剂(PLPP)的共同作用下,使用PRIMO系统来局部降解这个抗粘附表层。
 
问8:PRIMO能允许在无菌的条件下进行实验吗?
答:可以。用PRIMO操作的实验可以在无菌的环境下进行,即使PRIMO仪器没有设置在无菌的房间中。这时,我们推荐在生物安全柜(BSC)中进行所有的洗涤和培养步骤,然后将样本放入一个封闭的培养板,然后放到PRIMO仪器的电动载物台上。
 
问9:PRIMO能用来在3D结构上打印蛋白图案吗?
答:PRIMO可用来在各种表面上打印图案,无论是否是平的、卷曲的或是有微结构的。例如,它可以将蛋白打印在微孔板的孔壁上,或PDMS的微柱上。可以按需提供这些内部数据。
 
问10:是否总是将光活化PLPP试剂和PRIMO配套使用?
答:PLPP可以加速光图像化过程中,抗污聚合物的降解作用(只需几秒钟,而不是几小时)。然而,使用SU8树脂或NOA进行微制造(microfabrication)操作是不需要使用PLPP的,因为这些材料在PRIMO光波长(375nm)下是光敏感的。
 
问11:在基质上需要进行什么样的抗污聚合物表面处理?
答:我们推荐使用PLL-PEG聚合物。我们定期开发新的实验方法以促进表面包被层的稳定性。
 
问12:仪器的视野的深度有多少?
答:当使用20x物镜时,激光穿透透明基质的视野的深度大概是200-300µm。
 
问13:仪器的分辨率有多少?
答:当使用20x物镜时,在大概500x300µm的视野中,整个视野的分辨率是1.2µm。
 
问14:能做的最大图案尺寸是多少?
答:PRIMO可以做任意尺寸的图案,没有大小限制。
 
问15:用PRIMO仪器哪些蛋白可以被图案化?
答:我们的团队和用户使用超过10种不同的蛋白,包括:Fibrinogen-488、Fibrinogen‐647、Fibronectin、GFP、Neutravidin‐488、Neutravidin‐647、PLL‐PEG‐Biotin、Protein A‐647、Streptavidin,和初级、次级抗体。
 
问16:用PRIMO仪器,哪些基质可以用来进行蛋白的光图像化操作?
答:PRIMO可用来对各种标准细胞培养基质进行图案化,包括:PDMS、玻璃、塑料、NOA、SU8。我们的研发团队也在定期测试和验证新的基质。可以按需提供这些内部数据。
 
问17:用PRIMO进行微制造(Microfabrication)时,需要用到哪些光阻材料(Photoresist)?
答:所有在375nm下敏感的光阻材料都可以与PRIMO配套使用。我们的研发团队主要用SU8光阻材料。
 

 


互联网
仪器推荐
文章推荐