Maurice-nrCE-SDS测试铰链稳定型的IgG4亚类
Maurice-nrCE-SDS方法测试了包括两种野生型HzIgG4k（natalizumab和reslizumab）和三种铰链稳定的hzIgG4k（ixekizumab和pembrolizumab）和huIgG4k（nivolumab）生物制药产品。结果显示H2L2种类的数量在93.7％至96.3％之间变化。与其他IgG亚类相似，在这五种产品中发现的主要片段是H2L，质量约为125kDa（相对量在1.6％至3.9％之间），其它碎片含量极低（仅在0.1％和0.5％之间）。与其它治疗性mAb相比，主要差异与％HL有关。其中野生型IgG4分别为natalizumab和reslizumab的HL%异常高，分别等于2.2％和3.9％。其原因在于野生型的IgG4：(I)铰链区相关的灵活性，(Ii)铰链区中两个重链之间相对不稳定的二硫键，(Iii)两个重链的两个CH3结构域之间的非共价相互作用，从而促进了两个IgG4s之间的h-l对交换。尽管如此，Maurice-nrCE-SDS方法仍然轻松评估IgG4亚类产品中分子量变异体的数量，并且只需对电泳图进行目视检查即可快速评估野生型和铰链稳定IgG4之间的差异。
Maurice-nrCE-SDS测试ADC药物
Maurice-nrCE-SDS方法检测了两种第二代ADC的适用性，即铰链半胱氨酸共轭Brentuximab vedotin和赖氨酸共轭Trastuzumab emtansine。ADC药物的特征是具有一定的药物负荷分布(DLD)、药物与抗体比(DAR)和仅由链间静电相互作用维持的H2L2结构。结果显示ADC药物brentuximab vedotin中的8.1％的H2L2与通过HIC或native-MS评估的裸抗体量一致。L（+1接头有效载荷，PL），H（+3LP），HL（+2LP），H2（+2LP），H2L（+1LP）和H2L2可以通过基线分辨率分离。NrCE-SDS虽然不是分析半胱氨酸连接的ADC DLD和DAR的首选方法，但可以用作鉴定方法和批次的一致性。Trastuzumab emtansine是一种赖氨酸偶联的ADC，在赖氨酸共轭的情况下，这些ADC的H2L2结构通过链间二硫键得以维持。因此，nrCE-SDS可以确定和分离单体和碎片，如图所示，所有的L，H，HL，H2，H2L和H2L2均已很好地分开，且H2L2天然单体形式约占96％，与trastuzumab母体裸抗一致。
Maurice-nrCE-SDS应用于药物生产工艺
Maurice-nrCE-SDS方法检测了在两种不同培养条件下，在CHO细胞中产生的两个不同批次的相同抗体（HzIgG1k）的nrCE-SDS结果以及质谱鉴定结果。揭示了在大规模单克隆抗体生产过程中，需要优化上游和下游的生产工艺才能解决由于二硫键的部分还原而引起的抗体片段化。而nrCE-SDS与质谱联用是需要在整个药品开发阶段使用。
附表（Maurice-nrCE-SDS方法测试26种单克隆抗体（mAbs）和2种抗体药物偶联物（ADCs）结果）
结论：
本研究利用Maurice-nrCE-SDS方法建立了一种通用的nrCE-SDS方法，用于确定具有不同亚型和轻链特异性的多种治疗性抗体的分子量变异体（H2L2和LMW）的适用性。就相对迁移时间和片段与完整mAb的相对百分比而言，Maurice-nrCE-SDS方法重复性极佳。且该方法已成功应用于IgG1，IgG2和IgG4亚类和ADC药物。因此此方法可用于QA/QC环境下生物制药产品的放行、稳定性、批次一致性和保质期评价。
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