基于细菌外膜囊泡的H1N1/冠状病毒双联疫苗的制备

来自德国吉森大学等的科学家们在2019年第7期的《Vaccines》杂志上发表了题为“Bacterial Outer Membrane Vesicles (OMVs)-Based Dual Vaccine for Influenza A H1N1 Virus and MERS-CoV”的文章。文中，研究人员开发了一种基于细菌外膜囊泡（OMV）的疫苗，其可递呈甲型流行性流感病毒（H1N1）2009株（H1N1pdm09）H1型血凝素（HA）和中东呼吸道综合征冠状病毒（MERS-CoV）受体结合结构域（RBD）的抗原性稳定嵌合融合蛋白，缩写为OMVs-H1/RBD。研究结果表明，嵌合抗原可诱导对抗两种毒株的特异性中和抗体，免疫的小鼠可形成针对H1N1pdm09的保护，并有效中和MERS-CoV。所以，可认为，递呈病毒性抗原的OMV疫苗是一种对抗两种不同病毒感染的安全、可靠的方法。

实验操作中，E.Coli DH10β菌转染pMP-H1/RBD质粒，LB琼脂糖平板克隆筛选，接种至5mL 液体LB，培养16h，然后培养液接种至大体积培养。

OMV通常从转染的E.Coli DH10β细胞的上清液纯化。操作时，2L的DH10β培养液于37℃ LB肉汤中摇瓶培养，直到对数生长期（OD600nm 1.0）。生产的细菌离心，上清液使用0.22μm过滤器过滤，去除残留的菌体。之后，无细菌的上清液用KrosFlo KR2i 切向流过滤系统及100kD中空纤维膜超滤浓缩至终体积30mL。获得浓缩液进一步4℃ 150,000xg超速离心3h，分离OMV馏分。之后，含有OMV的沉淀重悬于300μL PBS，除菌过滤，并于-80℃储存。

为对含有嵌合HA/RBD抗原的OMV进行鉴定，使用免疫印迹分析确定OMV中存在MERS-CoV的RBD和H1N1pdm09的H1-HA，并确认存在连接RBD的HA病毒蛋白，其分子量与HA0-RBD之和相当。

原文：M.M.Shehata, A.Mostafa, L.Teubner, et al., Bacterial Outer Membrane Vesicles (OMVs)-Based Dual Vaccine for Influenza A H1N1 Virus and MERS-CoV. Vaccines, 2019, 7(46), doi:10.3390/vaccines7020046.