HeLa细胞通过关闭某些信号通路(包括PI3K和MKK4/MAPK信号通路),激活某些信号通路(包括cAMP、Ca~(2+)—CaM、PKC、Ras和P38/MAPK信号通路),激活或抑制不同的信号分子,使细胞产生具有针对性的细胞效应,包括诱导表达多种特异性蛋白(酶、细胞骨架蛋白、细胞因子等)、改变代谢途径、减弱某些代谢、加强另一些代谢以及提高胞内运输能力等,最终使自己可以适应痢疾杆菌的侵袭而生存下去。 为了鉴定在病原菌与寄主细胞相互作用中新的未知的EST序列,我们采用代表约4000个新基因的cDNA微阵列研究了痢疾杆菌入侵前和入侵后3h的人上皮细胞差异表达的新基因,结果共鉴定到≥3倍或≤0.33的差异表达的代表新基因的EST序列76条,然后这些EST序列采用Siclone软件分析,进行电子延伸,在BLAST比较分析之后,其中25个延伸序列鉴定为与重要的肠道功能相关的已知基因,包括痢疾杆菌-诱导的凋亡(TPPⅡ)、细胞骨架(如actin、talin、cofilin和gelsolin)、离子转运(calpain-5、Nedd4和Calcium-transporting ATPaseⅠ)、离子通道功能(如ABCA8、TPD52等)、粘膜屏障防御(CLECSF2)、异型生物质代谢以及上皮细胞的保护机制(vof-16)。更为重要性的是,通过RT-PCR克隆并测序,经BLAST搜索,鉴定到3个显著差异的新的EST序列,并用荧光实时定量RT-PCR实验证实这三个新序列的确在痢疾杆菌侵袭期间高表达。这三个基因是新的人基因或假基因,其相关信息已提交GeneBank,登录号为nos.AY776160,AY776161和AY776162。我们认为它们在细胞对痢疾杆菌2457T侵袭反应中起重要的作用。这些结果促进了对痢疾杆菌分子致病机理的认识,也为形成预防和治疗痢疾的策略提供了理论基础。
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