破膜剂的秘密（二）

流式染色中，最难的是破膜，了解破膜剂的秘密，能够更好地进行胞内染色。
为什么要进行破膜？

很简单，就是希望研究细胞内部的蛋白分子，正常情况下，荧光标记的抗体无法通过完整的细胞膜，只能在细胞膜上打出足够大的孔，才能使抗体进入细胞内。

一般，破膜主要分为以下几步：

（1）用醛类（多聚甲醛、甲醛、戊二醛）或有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮）固定或稳定细胞膜。

醛类在固定的同时可以增加细胞渗透性，但还不足以使抗体进入。但如果用有机溶剂固定，那么后续的破膜就不需要了。

（2）用去污剂或溶剂破膜。

（3）将细胞与胞内抗体或标记物孵育。

我什么时候需要用去污剂？

用去污剂最常见的应用有：

（1）洗液：在PBS洗液中加入低浓度的去污剂可以减少一些非特异性染色，这个技巧不知道吧？千万别告诉别人：）

（2）破膜：对细胞膜打孔，实现胞内抗原染色。

（3）溶解细胞膜：用去污剂可提取细胞膜成分，进行免疫共沉淀分析。

什么是去污剂？工作原理是什么？

见下图，去污剂由多个单体分子组成，每个单体分子均有亲水的头部和疏水的尾部（图中的a），在高浓度情况下，多个单体分子组合成一个聚合分子（图中的b）。当去污剂与细胞膜脂质层作用时，就能够嵌入到脂质分子中间，随着浓度增加，去污剂就会影响细胞膜结构，使膜上现成小孔（图中的c）。如果浓度进一步增加，去污剂就会把膜成份解离下来，包裹起来，这就是为什么用去污剂处理后膜的成份会丢失。