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PCR实验室SOP文件(五)

2021.5.24
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

生物安全柜的使用与维护标准操作程序
1 目的:保证生物安全柜内的高洁净、 无污染。
2 适用范围:生物安全柜
3 使用方法:
3.1 检查电源电压是否匹配后,接通电源。
3.2 生物安全柜工作前必须预先打开风机。
3.3 生物安全柜工作时先关闭紫外灯,工作时不要将移门移过安全线的高度。     
3.4 生物安全柜使用后即刻以5%施康消毒液洗擦工作台面,再以75%酒精擦一次;紫外灯消毒30分钟后关机。
3.5工作台面禁放不必要的物品,以保持工作区的洁净气流不受干扰。
3.6 禁止在工作台面上记录书写,工作时尽量避免作明显扰动气流的动作;禁止在预过滤进风口部位放置物品,以免挡住进风口造成进风量减少,降低净化能力。
3.7 经常用沙布沾上酒精将紫外线杀菌灯表面揩擦干净,保持表面清洁,以免影响紫外灯消毒效果。
4 本SOP变动程序:本SOP的变动,可由任一使用该文件的工作人员提出,报室
技术负责人批准,如通过则公布实行。



旋涡振荡器使用与维护标准操作程序
1.目的:保证待处理样品的完全混匀。
2.适用振荡器范围:各种类型的旋涡振荡器。 
3.标准操作:
3.1旋涡振荡器应置于坚固的水平台上。
3.2检查电源电压是否匹配后,接通电源。
3.3 将样品管垂直或略为倾斜的放置于振荡盘上,开机振荡数秒或数分钟直至样
品完全混匀后,关机。
3.4 切忌将样品管平躺或倒转振荡,以免管内液体渗出。
3.5 保持振荡器清洁、干燥。
4.该SOP变动程序:本SOP的变动,可由任一使用该文件的工作人员提出,报室
技术负责人批准,如通过则公布实行。

 

 

加样器使用与维护标准操作程序
1.目的:保证加样器加样的准确性。
2.适用加样器范围:各种品牌、型号的固定、可调和多通道加样器。
3.标准操作:
3.1设定容量值
    根据所需取液量选择相应的加样器;可调式加样器应在允许容量范围内调节。 连续可调式加样器容量计读数由三位拨号数字组成(显示所转移液体容量),从上(最大有效数字)到下(最小有效数字)读取;利用底部刻度可将容量刻度调节到更精确的分度。
    本室使用Finnpipette(F型)加样器是连续可调的、计量和移液的专用仪器。加样器有各种不同的型号,F右下角数字为加样器最大容量值,代表加样器的型号已标明在按钮上。容量范围自0.5ul至1000ul(各型号容量范围见括号内)。 
F10(0.5—10ul)   F50(5—50ul)   F200(20—200ul)   F1000(200—1000ul)  以此类推。
表1:F型加样器的应用范围
F10 超微量计量及移液,应用于DNA定序及酶分析等。
F50、F 200 和F1000 应用于一般水溶液、酸、碱的计量和移液。
3.2 吸液和放液:
    首先选择一支合适的吸嘴安放在加样器套筒上。稍加扭转地压紧吸头使之与套筒间无空气间隙。未装吸头的加样器绝不可用来吸取任何液体。最常用的吸液和放液方式有两种。
3.2.1前进式:    
a) 吸液:把按钮压至第一停点; 垂直握持加样器,使吸嘴浸入液样中,浸入液体深度视型号而定:
  F10
  F50 和F40
  F200 和F1000       ≤1mm
     2--3mm
     2--4mm
缓慢、平稳地松开按钮,吸液样,待移液器吸满液体后等一秒钟,然后
将吸嘴提离液面,贴壁停留2-3秒,使管尖外侧的液滴滑落。
  b)放液:将吸嘴贴到容器内壁并保持100—400倾斜。平稳地把按钮压到第一停点,放出液体,等1-2秒钟后把按钮压到第二停点以排出剩余液体。压住按钮,停留1-2秒钟,提起加样器,松开按钮。按吸嘴弹射器除去吸嘴。(只有改用不同液体时才需更换吸嘴。)
  c)加样本等液体量较多时使用。
3.2.2倒退式:
  a)吸液:把按纽压到第二停点,垂直握持移液器,使吸嘴进入液样中,缓慢平稳的松开按纽吸液样。吸满液体后,将管嘴撤出液面,贴壁停留2-3秒,使管尖液滴滑落。
  b)放液:将吸嘴贴到容器内壁,并保持100—400倾斜,轻轻按下按纽到第一点放出液体。遗留在管嘴尖的液体随吸嘴一起扔掉或按至第二停点放回原来液体管中。
  c)此种方式适用于高粘度液体;易起泡沫的液体或极小量的液体。
3.3 预洗
当取液体积大于10 ul时,为了保证吸液的精密度和准确性,装上一个新吸嘴(或改变吸取的容量值)时应预洗吸嘴,即先吸入一次液样并将之排回原容器中,反复2-3次。这是因为第一次吸取的液体会在吸嘴内壁形成液膜,导致计量误差。而同一吸嘴在连续操作时液膜相对保持不变,故第二次吸液即可消除误差。
而当液体体积小于10 ul,只有在没有预洗,同时要将吸取的液体在要转入的液体中反复吸打几次,排空液体,再将吸嘴提出并贴壁停留1-2秒,才能保证取液的精密度和准确度。
3.4 致密及粘稠液体
对于密度低于水的液体,可将容量计的读数调到低于所需值来进行补偿。
例如:用F50加样器转移10 ul血清。先将读数调到10ul,吸取后以重量法测定。
如实测体积为9.5ul,即偏差0.5ul,则将读数调到10.5ul并重复一次。如第二
次仍不够准确,根据偏差再作调整。
     排放致密或粘稠液体时,宜在第一停点多等一两秒钟再压到第二停点。


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